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SPR系統(tǒng)產(chǎn)生的空間成像面積隨著時間推移 | |||
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劍橋顧問有限公司(英國劍橋)開發(fā)的SPR系統(tǒng),提供改善SPR測量。基于相位差,該系統(tǒng)產(chǎn)生的樣本空間成像面積隨著時間的推移。結合動力學與Flexchip的SPRimager II系統(tǒng)中,可以觀察到了一個區(qū)域。涉及表面的相互作用的動力學作為一個例子,示出的移動的結合水平的金表面以及一個橢圓形的底部。
劍橋顧問系統(tǒng)采用了單片式結構,以限制振動的干擾(參見圖3)的干涉儀。黃金表面有兩個照明區(qū)域:左側區(qū)域是光參考區(qū),右邊是樣本區(qū)域。參考區(qū)域是用相同的緩沖溶液作為樣品區(qū),但沒有相關的化學淹沒。整個實驗過程中,以減少熱漂移,這兩個區(qū)域都保持在相同的溫度。
干涉條紋字段被捕獲在選擇的時間間隔,并在頻域上的傅立葉方法處理,得到樣本區(qū)域的參考區(qū)相對折射指數(shù)的輕微變化。圖4顯示了一個示例附帶字段和一個產(chǎn)生的空間圖像的特異性和非特異性抗體結合的樣本區(qū)域。為了詢問同時兩種抗體的樣品區(qū)域被劃分為兩個橢圓形而不是一個井。實際上是夸大了的入射角以同樣的方式,查看一個圓傾斜使得它出現(xiàn)橢圓孔的縱橫比。同樣,圓形準直照明形成一個橢圓形的樣品區(qū),這些實驗為約3.5×6毫米。
已經(jīng)證明該系統(tǒng)使用兩個挑戰(zhàn)各孔中相同的蛋白質的抗體結合的差。在左方的抗體以及抗-HA的抗原表位特異性結合的蛋白質上的暴露的頂。相反,一個不匹配的抗體,cMyc,不綁定的抗原表位,并顯示小差分信號。
的圖像區(qū)域中包含兩個橢圓形井之間的控制區(qū)域,這是實現(xiàn)由聚二甲基硅氧烷掩模??刂茀^(qū)域進行監(jiān)視,以提供一個直流校正,占熱漂移。橢圓形井發(fā)生約束力的位置顯示出減少的折射率。這對應于一個本地由于各孔中的蛋白結合的抗體,在金表面上的厚度增加。
這種變化的幅度表示的結合量。井反復洗滌的緩沖液,以除去任何非特異性結合的分子,這是監(jiān)測特異性結合的材料,制得最終的水平。圖5示出了三個合適的圖像區(qū)域的直流校正信號的平均:在左邊以及,參考區(qū)域在兩者之間,以及右側。與匹配的蛋白質的最終結合的抗體水平的幅度是明顯的不同的電平與非匹配蛋白的抗體。其結果是辨別能力的蛋白質,它包含的抗體的結合位點。
系統(tǒng)的另一個例子的空間特征表現(xiàn)出半抗原:蛋白質相互作用的樣本區(qū)域的右半部分上圖案化使用生物素陣列。與液體的整個覆蓋范圍,綁定發(fā)生用親和陣列中的的三重峰。在圖7中的兩個例子,是協(xié)會解離曲線,表明數(shù)組元素之間的結合親和力的差異。
相位成像此SPR安排??的功能,可以用于檢測樣品流動的暴露區(qū)域上的點陣列中的綁定事件。此功能也可用于監(jiān)測結合在單獨的信道配置在微通道陣列,每個流具有不同的分析物。許多令人興奮和商業(yè)前景的新興應用SPR每年從不同的研究領域。一些例子包括以下內(nèi)容:臨床診斷,生物武器的病原體檢測,蛋白質相互作用研究,蛋白質表達分析,蛋白質 - 藥物相互作用分析,疫苗研制,過敏原的食品安全,抗生素殘留,或病原體的蛋白質檢測和化學檢測污染物。
面臨的挑戰(zhàn)是重新包裝的SPR系統(tǒng)到一個低成本的,手持式的,潛在的可支配系統(tǒng)從基于實驗室的儀器,而利用基于圖像的方法。兩所大學的小組開發(fā)基于圖像的方法,使用相位差信興高等工程研究所(香港),成大(臺南市)。在西雅圖華盛頓大學的研究人員也正在開發(fā)基于SPR測量唾液中的分析物。有競爭力的免疫苯妥英鈉開發(fā)利用戰(zhàn)略石油儲備來衡量不同的處理的預處理唾液樣本。
SPR系統(tǒng)的開發(fā)和利用,將繼續(xù)作出貢獻新的體外診斷試劑的出現(xiàn)與高感光度。搜索訪問全球醫(yī)療保健提供商的體外診斷可能會轉向使用SPR。在發(fā)達世界中的實驗室,SPR系統(tǒng)被用來尋找新藥,并更好地了解蛋白質相互作用。眾多的SPR系統(tǒng)獲取商業(yè)成熟,導致顯著的醫(yī)療和科學發(fā)現(xiàn),難以捉摸的等離子體將有更大的影響力超出了以上幾個納米一條細細的金層。
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