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| 探針的選擇銪螯合物為基礎的顆粒 | |||
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發(fā)展高度敏感性和特異性橫流測定的一個關鍵因素是使用合適的探針具有良好的物理，化學和光譜性質。探頭的特性決定了讀者發(fā)展的許多方面，包括成本，體積，復雜度和性能。時間分辨發(fā)光橫流測定粒子探測器應具有較強的發(fā)光壽命長（例如，超過40微秒）和一個大的環(huán)境條件下的斯托克斯位移。他們應該能夠被激發(fā)的市售的廉價的光源，如發(fā)光二極管（LED）。該探針也應以正確的尺寸和表面官能團的表面共價標記的識別分子（如抗體）的單分散。此外，他們應該是化學，物理和光化學穩(wěn)定的。
銪螯合物為基礎的顆粒是一個明顯的探針的選擇。初步研究。銪顆粒有很強的吸收在365 nm，615 nm處的強熒光，長壽命為500μs，和一個巨大的斯托克斯位移為245 nm。銪均分散粒子的表面的官能團，例如羧酸是可商購自多個企業(yè)（如Molecular Probes公司）。然而，有兩個主要的性能都使得他們不到理想的時間分辨發(fā)光橫流測定。一方面，可以有效激發(fā)粒子只能由一個365納米的紫外線的光源，這是昂貴的。另一方面，顆粒在紫外光照射下受到嚴重的漂白。此外，由于在365-375 nm的紫外線激發(fā)，它們可能不適合于安全原因，基于消費者的體外診斷產(chǎn)品。盡管如此，他們仍然是有用的時間分辨發(fā)光橫流測定。
金佰利已經(jīng)連著幾個抗體共價銪顆粒標記抗體。通過一個樣品中分析物的側流測定條上的檢測區(qū)由其他固定化的抗體結合物被抓獲。當從熒光或UV LED 365-375納米的UV光激發(fā)銪粒子捕獲檢測區(qū)域，從激發(fā)光的散射光強和熒光的硝酸纖維素膜延伸400-650納米。這樣的強散射光，使得它難以分離銪粒子通過基于波長的分離技術（例如，光學濾光器）在615 nm處的相對較弱的信號。
然而，銪粒子在615 nm處的熒光信號可以被分離，硝酸纖維素膜的散射光和熒光的通過時間分辨技術。例如，所有的背景信號，如硝酸纖維素膜衰減后40微秒的延遲幾乎為零的散射光，熒光，而銪顆粒后，依然強勁的熒光信號的時間延遲，因為它的壽命長（500微秒）。金佰利的實驗也表明，全血和血清的自體熒光的時間分辨熒光測量，也可以拒絕。這樣一個完整的消除背景無法實現(xiàn)的，其中從背景中，由于波長重疊，分開的發(fā)光波長的差異還通過傳統(tǒng)的熒光測量。
銪顆粒雖然有許多吸引人的特性，時間分辨熒光橫流測定的探頭，可以激發(fā)粒子通過365納米的紫外線光源。正如前面提到的，激烈的光源為365 nm不便宜，紫外線是不是安全的消費者為基礎的體外診斷產(chǎn)品。此外，365-375-nm的光傳輸通過硝酸纖維素膜有限。這些缺點限制了使用銪顆粒作為探針時間分辨熒光橫流測定的檢測靈敏度。
由于缺乏合適的商業(yè)探頭，金佰利開發(fā)一類新的單分散性和表面功能納米磷光時間分辨發(fā)光橫流測定與理想的物理和光譜性質。Pt基顆粒100微秒的壽命在390-410 nm（前）在650 nm處，表現(xiàn)出強烈的磷光和Pd基的顆粒在670 nm處有較強的磷光了500微秒的壽命（前400-420 nm）的環(huán)境條件下（參見圖2）。這些顆粒還具有大的斯托克斯位移（Stokes shift）（這兩個粒子280 nm處）。
這些粒子與銪顆粒相比的優(yōu)點包括最小的漂白，并且能夠應用便宜且功能強大的光源，如LED有效激發(fā)。此外，背景熒光較低時，為雙方共同的生物基質和硝酸纖維素膜在390-420 nm激發(fā)，而不是365納米。雖然發(fā)射390-420納米的光通過硝酸纖維素膜也不夠理想，最好是超過365納米的光，使之更適合為transmissional模式測量。顆粒共價標記的CRP單克隆抗體，并提供了一??個敏感的時間分辨橫流測定CRP。
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