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加強(qiáng)檢測(cè)性能利用納米檢測(cè) | |||
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ELISA試劑盒和側(cè)流檢測(cè)的檢測(cè)技術(shù),可以提高靈敏度,同時(shí)降低了所使用的試劑的總量。在免疫診斷和核酸檢測(cè)方法在共同使用的固體表面,其上的生物活性試劑的涂層,如抗體,抗原,或低聚物探針。這種生物大分子復(fù)雜的長(zhǎng)鏈結(jié)構(gòu),擁有最佳的三維構(gòu)象特異位點(diǎn)的結(jié)合位點(diǎn)或表位。然而,常規(guī)的生物活性分子沉積到固體表面上是一個(gè)低效的和隨機(jī)的過(guò)程。而可以很容易地涂布到塑料表面的抗體,例如,只有一個(gè)子集所沉積的分子將具有可用于反應(yīng)的Fab結(jié)合區(qū)域(參見(jiàn)圖1)。這種隨機(jī)性的assayís結(jié)合能力和靈敏度依賴(lài)于傳統(tǒng)的涂層技術(shù)限制。
納米智能檢測(cè)系統(tǒng)(網(wǎng)絡(luò)入侵檢測(cè)系統(tǒng))技術(shù),通過(guò)ANP Technologies公司(特拉華州Newark)已被設(shè)計(jì)為在納米水平的生物活性分子的取向控制用的聚合物支架共價(jià)結(jié)合的粘合劑如antibody.1在此共軛結(jié)構(gòu)的聚合物支架優(yōu)先附著于固體表面延伸表面相差的合算的免疫反應(yīng)的抗體。的共軛本身的表面上面向納米抗體分子自組裝陣列。其結(jié)果是涂覆的表面,具有更大的結(jié)合效率。這樣的取向控制和自組裝的好處,可以擴(kuò)展到任何生物活性分子。
NIDS技術(shù)已被應(yīng)用到預(yù)涂微孔板,創(chuàng)造出一系列高度敏感的工具,可用于藥物發(fā)現(xiàn)和臨床前研究和臨床研究。ANP技術(shù)開(kāi)發(fā):NIDS激活鏈霉親和素(SA) - neutravidin(NA)涂層鋼板名為HyperBind的。生物素化的抗體和其它蛋白質(zhì)是一種常見(jiàn)的過(guò)程,而該時(shí)與HyperBind板相結(jié)合,以更高的靈敏度和降低試劑usage.2這使研究人員能夠不進(jìn)行所要求的復(fù)雜的合成方法的情況下得到網(wǎng)絡(luò)入侵檢測(cè)系統(tǒng)的好處納米操縱,檢測(cè)到用戶(hù)的提供。HyperBind板中提供清晰,黑,白等色,熒光和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)格式格式,分別為。HyperBind板塊已經(jīng)比較許多其他的商業(yè)板塊。實(shí)現(xiàn)共軛鏈菌素或neutravidin的錨定聚合物支架的納米定位導(dǎo)致了性能增強(qiáng)。
生物素蛋白直接綁定SA HyperBind板已表現(xiàn)出更大的結(jié)合效率生物素蛋白,比其他商業(yè)SA板(見(jiàn)圖2)。在一個(gè)有代表性的實(shí)驗(yàn)中,生物素化的小鼠IgG的抗體濃度增加100μL,分別加入的井的HyperBind板,一個(gè)Nunc公司防盜系統(tǒng),一個(gè)皮爾斯HBC Reacti-綁定,和一個(gè)R&D系統(tǒng)EvenCoat板,和培養(yǎng)上的一小時(shí)搖床。洗滌后,向孔中加入100μL的兔抗小鼠IgG抗體結(jié)合到辣根過(guò)氧化物酶(HRP),并允許一個(gè)一個(gè)半小時(shí),在一個(gè)平臺(tái)上搖床孵育。在洗滌工序中,由過(guò)氧化氫和四甲基聯(lián)苯胺(TMB)的基板/色原試劑加入到孔中。顏色發(fā)展20分鐘,并用2N硫酸停止,并在450 nm處測(cè)定吸光度。
NA板與的黑色HyperBind SA以及用于基于熒光的檢測(cè)進(jìn)行了類(lèi)似的比較。涂上黑色原料聚苯乙烯??微孔板與鏈霉和neutravidin的使用NIDS化學(xué)為清澈板優(yōu)化。的結(jié)合效率的HyperBind板被證明是優(yōu)于皮爾斯Reacti-Bind和Nunc公司防盜系統(tǒng)黑色板的使用前面所描述的熒光酶底物試劑(參見(jiàn)圖3)與生物素化的小鼠IgG的測(cè)試程序時(shí),。
白酒板塊也被視為與NIDS激活鏈霉親和素的使用基于化學(xué)發(fā)光的檢測(cè)。的結(jié)合效率的HyperBind板也顯示出優(yōu)于Nunc公司防盜系統(tǒng)白色板時(shí)使用的測(cè)試程序與前面所描述的生物素標(biāo)記的小鼠IgG和化學(xué)發(fā)光底物試劑。
從上面的實(shí)驗(yàn)中得出的結(jié)論是,對(duì)于一個(gè)給定濃度的生物素標(biāo)記抗體添加到微孔中,更多的蛋白質(zhì)可以比皮爾斯,R&D系統(tǒng),NUNC板HyperBind清晰,黑色和白色板的約束。這一發(fā)現(xiàn)可以轉(zhuǎn)化為更好的檢測(cè)性能和減少試劑的使用和成本。
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