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		細(xì)胞生產(chǎn)中進(jìn)給速率對(duì)抗體的影響

　　對(duì)抗體生產(chǎn)中加料速度的影響在生物反應(yīng)器系統(tǒng)檢查。上海生物反應(yīng)器系統(tǒng)的效果進(jìn)行了研究使用BR3530筒與METH7-4B6細(xì)胞株接種。

　　細(xì)胞的清除。細(xì)胞清除的影響產(chǎn)生抗體和生物反應(yīng)器運(yùn)行長度決定在上海BR3530盒和PCP1.9D10細(xì)胞系。哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生長在hollow-fiber墨盒有一個(gè)有限的生命。推測(cè),積累細(xì)胞減少系統(tǒng)的生產(chǎn)力通過抑制整個(gè)hollow-fiber膜營養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸,導(dǎo)致細(xì)胞死亡。是否定期刪除多余的細(xì)胞生物反應(yīng)器筒ECS將延長運(yùn)轉(zhuǎn)周期和提高搖搖欲墜的運(yùn)行參數(shù),如粗糖和抗體生產(chǎn)調(diào)查。

　　收獲方法。抗體是收獲的ECS定期墨盒是接種后兩周內(nèi)開始。兩種收獲模式被使用,都使用相同的設(shè)備。在連續(xù)模式下的收獲,蠕動(dòng)泵(Cole-Parmer,芝加哥)撤回了媒介的ECS緩慢,恒定速率(50 - 200毫升/天)。同時(shí)同等體積的新鮮培養(yǎng)基被引入的ECS相同泵通過使用一個(gè)單獨(dú)的塊油管通過泵運(yùn)行。收獲瓶定期改變,及其內(nèi)容centrifuged g在1000 * 10分鐘去除細(xì)胞和碎片。包含抗體的上清當(dāng)時(shí)的存儲(chǔ)??20°C在測(cè)試之前。第二個(gè)收獲模式是一個(gè)批處理方法:固定體積的介質(zhì)(50?250毫升)注入一次ECS,取代同等體積的antibody-rich室中。這是每周兩到三次重復(fù)。收成被以同樣的方式處理他們的連續(xù)模式。

　　結(jié)果

　　細(xì)胞生長和抗體生產(chǎn)。鐵道部9 b1細(xì)胞系和BR3530盒,這是決定在兩個(gè)單獨(dú)的運(yùn)行,平均19天被要求生產(chǎn)第一個(gè)克抗體。這個(gè)細(xì)胞株在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)Acucell 1100盒需要31天生產(chǎn)1克的抗體(表1)。

　　類似的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行VA1 18 d7細(xì)胞系。的Clirans T220筒需要33天生產(chǎn)1 g的抗體,金額相當(dāng)于10000兆瓦的另一盒(BR2010),這需要32天產(chǎn)生相同的金額。但同樣VA1 18 d7細(xì)胞系生長在BR3530(30000 mw)生物反應(yīng)器筒只需要17天生產(chǎn)1 g的抗體。同樣,30000兆瓦生物反應(yīng)器筒需要17天到達(dá)的目標(biāo)電流的250毫克/人力資源,而所需的10000兆瓦的兩個(gè)墨盒31日和30天,分別達(dá)到這一水平。

　　類似的結(jié)果——13和26天,分別獲得了——與鐵道部9 b1細(xì)胞株BR3530 Acucell 1100墨盒。的平均時(shí)間10000 mw -孔隙大小筒需要達(dá)到目標(biāo)水平(1 g抗體生產(chǎn))是32天。這與平均為30000 mw盒16天。同樣,所需的平均時(shí)間10000 mw -孔隙大小筒達(dá)到250毫克/人力資源的目標(biāo)電流的28天與18 BR3530盒。

　　抗體生產(chǎn)效率。我們比較了每個(gè)hollow-fiber墨盒產(chǎn)生抗體的能力作為intracapillary介質(zhì)消耗的數(shù)量的函數(shù)由系統(tǒng)在實(shí)驗(yàn)。這些值被表示為毫克每升中等消費(fèi)產(chǎn)生的抗體在整個(gè)運(yùn)行。

　　使用鐵道部9 b1細(xì)胞系,我們確定最優(yōu)生產(chǎn)效率50 mg / L的BR3530墨盒和24 mg / L Acucell 1100盒。 VA1 18 d7細(xì)胞株生長在10000 mw墨盒有35毫克/升的生產(chǎn)效率Clirans T220 BR2010墨盒和30毫克/升。然而,當(dāng)相同的細(xì)胞系是生長在BR3530墨盒(30000 mw),效率增加到44 mg / L的介質(zhì)消耗。

　　比較的抗體生產(chǎn)BR3530 hollow-fiber筒,在72小時(shí)的靜態(tài)組織培養(yǎng)(表1)揭示了一個(gè)相關(guān)性的抗體的細(xì)胞株產(chǎn)生72小時(shí)文化和數(shù)量在30000 mw生產(chǎn)墨盒。

　　進(jìn)給速率。進(jìn)給速率對(duì)抗體生產(chǎn)的影響在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)測(cè)量使用METH7-4B6-8C3.2.1細(xì)胞株生長在BR3530盒。在第一個(gè)實(shí)驗(yàn)中,intracapillary飼料率慢慢從0.5升/天增加到最多只有3.5 L /天(圖1)。在第二個(gè)實(shí)驗(yàn)中,intracapillary飼料率增加更快從1 L /一天最多5.0升/天。進(jìn)給速率較低的運(yùn)行產(chǎn)生抗體用更少的時(shí)間比送更高的運(yùn)行速度(圖2)。在40天,生產(chǎn)效率的low-feed-rate實(shí)驗(yàn)118 mg / L和high-feed-rate方案的生產(chǎn)效率是58毫克/ L(表1)。

　　抗體生產(chǎn)飼料率的影響以另外兩個(gè)實(shí)驗(yàn)用鐵道部9 b1 F11 P1.1.1細(xì)胞株生長1100年Acucell墨盒使用Acusyst jr .)生物反應(yīng)器系統(tǒng)。進(jìn)給速率開始的時(shí)候1 L /天,迅速加速到8.4升/天,運(yùn)行的效率增加了只有9 mg / L(圖3和4)。進(jìn)給速率較低的策略從0.6升/天,慢慢加速3.3升/天,生產(chǎn)效率幾乎增加了兩倍至24 mg / L(表1)?？偪贵w生產(chǎn)從每個(gè)運(yùn)行大約是相同的。

　　細(xì)胞的清除。當(dāng)PCP1。 9 d10細(xì)胞株生長在上海生物反應(yīng)器系統(tǒng)使用BR3530盒,只有25天后細(xì)胞達(dá)到融合。然后抗體生產(chǎn)開始急劇下降(圖5)。30天開始,細(xì)胞從盒中取出每周兩次將注射器充滿IMDM(沒有的邊后衛(wèi))extracapillary港口和大力推動(dòng)和拉動(dòng)注射器的柱塞。大量的細(xì)胞,細(xì)胞碎片和大量的抗體得到這個(gè)過程。

　　每個(gè)九cell-removal程序執(zhí)行后立即在實(shí)驗(yàn)這一個(gè)生物反應(yīng)器,抗體產(chǎn)量顯著增加。粗糖也有相應(yīng)的高程。 (圖5)。

　　批處理和連續(xù)的收成。的收獲模式是如何影響總抗體生產(chǎn)? 收獲的批處理模式使用注射器或更快的泵的速度清除抗體。當(dāng)VA1 18 d7細(xì)胞株生長在上海系統(tǒng)切換從連續(xù)到批處理方式收獲,抗體的濃度從平均增加413到3387?g /毫升(圖6)。

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