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| 基因組學已經(jīng)被診斷LabCD盤發(fā)展的焦點 | |||
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成套on-disc方法開發(fā)了DNA提取、PCR擴增,質(zhì)粒制備、和SNP檢測(見表2)。例如,圖8顯示了LabCD盤用于質(zhì)粒DNA隔離。 樣品進行細菌培養(yǎng),通過一系列的移動渠道,計量閥,過濾器來溶解和分離DNA。
在一系列的實驗中,大腸桿菌LabCD盤結(jié)果與萃取相比使用迷你工具包的質(zhì)粒提取試劑盒(Venlo、荷蘭)。 5-?l文化樣本應用于閥瓣,和不同階段的溶菌作用,洗滌、過濾和收集提取的DNA進行旋轉(zhuǎn)計劃從300 rpm,最后900 rpm超過10分鐘。 由此產(chǎn)生的DNA被使用與plasmid-specific PCR引物從閥瓣和放大,Qiagen-extracted與擴增的DNA。 DNA凝膠電泳的放大顯示,LabCD方法匹配的DNA提取試劑盒包(參見圖9)。凝膠上的DNA帶的身份建立了放大和運行一個已知(購買)質(zhì)粒的樣品。
四個人質(zhì)粒隔離單位可以放置在一個LabCD盤。 與其他LabCD化驗,LabCD質(zhì)粒盤需要較少的樣本和試劑卷比當前DNA提取所需的方法。 這LabCD也可以更快地完成提取,在自動sample-in,product-out格式。
LabCD發(fā)展的質(zhì)粒為基因組DNA的隔離閥瓣和修改光盤從血液導致發(fā)展的總DNA提取、PCR擴增盤:LabCD-PCR加上圓盤。 這個LabCD可以包含16 DNA提取和放大單元通過使用5 - 10?l樣品(如。標準品 、血、文化等),20到30分鐘可以完成整個過程,根據(jù)PCR的循環(huán)次數(shù)。 許多研究已經(jīng)描述了這盤的設(shè)計和功能。 6、9、10
樣品(5?l)的文化或生物流體應用于閥瓣。 使用專用旋轉(zhuǎn)計劃,10毫米的5?l樣品細胞溶解在氫氧化鈉在95°C 1分鐘釋放DNA和蛋白質(zhì)變性。 5?l的DNA溶液中和16毫米tris-HCl(pH值7.5),和混合的8 - 10?l PCR試劑和底漆。 盤上的DNA是放大與熱敏電阻加熱元件在一個旋轉(zhuǎn)的滾筒包含兩個每個分析熱電裝置。 閥瓣可以容納16個人微流體結(jié)構(gòu),允許16同時放大反應。
圖10。 ( 點擊放大 )On-disc大腸桿菌基因組DNA的提取和放大。 disc-amplified DNA完全相同的DNA放大使用標準thermocycler方法。
在一個例子中,2 -或10-?l樣本的DNA(8××103或103細胞)提取的大腸桿菌在盤上。 PCR擴增進行使用漆底漆,目標422 - bp lac我阻遏蛋白序列編碼,和EcoCtl底漆,放大一個隨機選擇的300 - bp序列。 On-disc放大使用變性步驟(95°C,2分鐘)和35放大周期(退火60°C 30秒,在72°C擴展30秒,30秒和變性在95°C)。 盤的放大DNA被發(fā)現(xiàn)和分析使用ethidium bromide-stained瓊脂糖凝膠電泳。 on-disc放大DNA與臺式放大用ptc - 100 Thermocycler MJ研究(沃爾瑟姆,MA)(見 圖10 )。
微流體提供了一種新方法的快速分析臨床和藥物分析物在各種排列和多路復用格式集成樣品制備,試驗和最終產(chǎn)品檢測在同一個平臺。 微流體分析的低量和快速的反應時間可以減少成本和昂貴的試劑,樣品制備和分析的復雜性。 微流控分析平臺的主要挑戰(zhàn)是制造成本和可再生的性能。 克服這些挑戰(zhàn)的關(guān)鍵是開發(fā)設(shè)計,最大限度地減少不一致的性能和簡化了大規(guī)模生產(chǎn)。
本文中描述LabCD地址和滿足這些挑戰(zhàn)沒有移動部件,只有依賴離心力驅(qū)動試驗反應。 這些屬性也使轉(zhuǎn)讓LabCD設(shè)計到大規(guī)模生產(chǎn)注塑,生產(chǎn)在生產(chǎn)運行成千上萬的可復制的光盤。 與自動化合成和檢測系統(tǒng),LabCD建立了微流體可以應用于廣泛的試管和分析系統(tǒng)。www.brmmt.cn
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