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		開(kāi)發(fā)一種生物熒光檢測(cè)HIV病毒載量監(jiān)測(cè)

　　以下三種通用的方法是目前在發(fā)展中國(guó)家來(lái)檢測(cè)和量化HIVRNA的可供選擇：反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR），核酸序列的擴(kuò)增（NASBA），和支鏈DNA（的bDNA）。每一種方法需要三個(gè)步驟：樣品制備和病毒核酸的提取，從檢測(cè)對(duì)象的病毒RNA，并檢測(cè)和/或擴(kuò)增產(chǎn)物定量所產(chǎn)生的靶核酸序列或信號(hào)放大6RT-PCR使用反向轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)化病毒RNA到互補(bǔ)DNA（cDNA），然后復(fù)制，因此可以被檢測(cè)到。在該方法中，RT-PCR定量HIVRNA，使測(cè)定病毒負(fù)荷。6是NASBA擴(kuò)增的等溫方法，其中，靶RNA是由3-酶系統(tǒng)放大，并通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性共擴(kuò)增的控制量化。這種方法消除了對(duì)所使用用于RT-PCR的熱穩(wěn)定酶和熱循環(huán)儀器。-PCR），核酸序列擴(kuò)增（NASBA）和支鏈DNA（的bDNA）。對(duì)照品

　　RT-PCR使用逆轉(zhuǎn)錄酶酶病毒的RNA轉(zhuǎn)化為互補(bǔ)DNA（互補(bǔ)），然后復(fù)制，因此可以被檢測(cè)到在這種方法中，RT-PCR量化艾滋病毒的RNA，使病毒載量的決心,目前，以下四個(gè)市售的病毒載量檢測(cè)所有使用這些通用的方法之一：科瓦斯AmpliPrep和科瓦斯的TaqManV2.0由羅氏分子系統(tǒng)，實(shí)時(shí)HIV-1由Abbott實(shí)驗(yàn)室，Versant的HIV-1RNA1.0試驗(yàn)（KPCR）由西門(mén)子醫(yī)療診斷和的NucliSENSEasyQHIV-1v2.0順次生物梅里埃公司。4,6科瓦斯的TaqManHIV-1的COBASTaqMan探針的HIV-1檢測(cè)是一種體外核酸目前，以下四個(gè)商用病毒載量分析所有一般使用其中的一個(gè)方法：科瓦斯AmpliPrep和科瓦斯的TaqMan2.0羅氏分子系統(tǒng)，實(shí)時(shí)的HIV-1由雅培公司，熟練的HIV-1RNA的1.0測(cè)定（KPCR）西門(mén)子醫(yī)療診斷，和的NucliSENSEasyQHIV-1V2.0梅里埃。

　　擴(kuò)增檢測(cè)為HIV-1RNA在人類血漿中使用的COBASAmpliPrep儀自動(dòng)試樣處理和自動(dòng)化的擴(kuò)增和檢測(cè)的COBASTaqMan探針?lè)治鰞x或科瓦斯的TaqMan48分析儀定量。這是一個(gè)完全自動(dòng)化的，實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)為目標(biāo)的HIV基因組，從而導(dǎo)致檢測(cè)的下限雙方的插科打諢和LTR地區(qū)。6的COBASTaqMan探針HIV-1的檢測(cè)只需要一定的技術(shù)技能，具有較寬的動(dòng)態(tài)范圍，是完全自動(dòng)化（包括樣品轉(zhuǎn)移），并且只需要分析一個(gè)單間，但它也有一些缺點(diǎn)。為了進(jìn)行的COBASTaqMan探針的HIV-1檢測(cè)，一些專用的實(shí)驗(yàn)室空間和設(shè)備是必需的，適度的技術(shù)支持是必不可少的。該設(shè)備也是昂貴的，通常是超出了任何發(fā)展中世界的設(shè)施，可提供空間和支持的范圍。6實(shí)時(shí)HIV-1。雅培實(shí)時(shí)HIV-1檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR，但不像TaqMan探針，它的目標(biāo)是在POLHIV基因組的整合區(qū)域。HIVRNA定量是使用m2000sp樣品制備和核酸的提取，并m2000rt用于擴(kuò)增和檢測(cè)的自動(dòng)化流程。6雅培實(shí)時(shí)檢測(cè)的主要優(yōu)勢(shì)包括其高吞吐量，大動(dòng)態(tài)范圍，而事實(shí)上，它可以是完全自動(dòng)化的，封閉的系統(tǒng)中的PCR。此外，該設(shè)備可用于評(píng)估HIV之外的其他病原體。然而，與的COBASTaqMan探針，該系統(tǒng)需要專用的設(shè)備和空間，良好的技術(shù)支持，并有相當(dāng)?shù)馁Y金投入。6Versant的HIV-1RNA的1.0。的Versant的HIV-1RNA1.0試驗(yàn)（的bDNA）是一種自動(dòng)檢測(cè)該還針對(duì)HIV基因組的聚合酶整合區(qū)域，使用樣品準(zhǔn)備模塊和擴(kuò)增/檢測(cè)模塊一次。6的Versant的測(cè)定法也具有高吞吐量和可以完全自動(dòng)化，從而降低污染的風(fēng)險(xiǎn)較放大試驗(yàn)定量的HIV-1RNA在人類血漿使用科瓦斯AmpliPrep儀器自動(dòng)標(biāo)本處理和科瓦斯的TaqMan分析儀或科瓦斯的TaqMan48分析儀自動(dòng)放大和檢測(cè)。

　　目前的商用實(shí)時(shí)HIV病毒載量測(cè)定的表一，主要特點(diǎn)。（點(diǎn)擊圖片放大。）表一，當(dāng)前商業(yè)實(shí)時(shí)HIV病毒載量的主要特征分析。（點(diǎn)擊圖片可放大）。PCR反應(yīng)。沒(méi)有特殊的實(shí)驗(yàn)室設(shè)置，或單獨(dú)提取區(qū)域是需要的，并且該設(shè)備還可以用于評(píng)估其他病原體。然而，Versant的檢測(cè)的主要缺點(diǎn)包括需要熟練的技術(shù)人員，良好的技術(shù)支持和財(cái)政資源。6的NucliSENSEasyQ。的的NucliSENSEasyQHIV-1的2.0版使用NASBA為目標(biāo)的gag區(qū)擴(kuò)增艾滋病毒和定量核糖核酸（見(jiàn)表I）。該測(cè)定游NASBA與實(shí)時(shí)檢測(cè)通過(guò)使用利用的NucliSENSEasyQ分析儀分子信標(biāo)。9的的NucliSENSEasyQ分析提供高吞吐量的優(yōu)勢(shì)與需要的唯一介質(zhì)技能。它也是一個(gè)完全自動(dòng)化的，封閉的系統(tǒng)。但是，它需要專門(mén)的空間和設(shè)備，并且有污染的高容量的實(shí)驗(yàn)室危險(xiǎn)。技術(shù)支持是必需的，增加了與此相關(guān)的試驗(yàn)已經(jīng)很高的成本.

　　NucliSENSEasyQ分析提供高吞吐量的優(yōu)勢(shì)只有中等技能要求。這也是一個(gè)完全自動(dòng)化的，封閉的系統(tǒng)，然而，它需要專用的空間和設(shè)備，有一個(gè)大容量實(shí)驗(yàn)室的污染風(fēng)險(xiǎn)。技術(shù)支持是必需的，已經(jīng)增加了高成本相關(guān)的分析。6

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