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		實(shí)驗(yàn)室需要高通量技術(shù)巴特非常適合

　　巴特是一個(gè)生物熒光記者分子診斷系統(tǒng),可以降低儀器成本和開辟新的應(yīng)用診斷和疾病監(jiān)測在資源貧乏的環(huán)境中。只需要一個(gè)single-temperature加熱塊和原有光探測系統(tǒng),巴特是專為使用等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)(iNAAT)。它結(jié)合了簡單而強(qiáng)大的化學(xué)和技術(shù)在實(shí)時(shí)closed-tube分析(要求最小的電輸入和溫度調(diào)節(jié)),啟動時(shí)樣品制備。巴特具有與一些現(xiàn)有的系統(tǒng)和其他系統(tǒng)相比在后期開發(fā)中,并能提高監(jiān)測病毒載量在發(fā)展中國家的艾滋病患者。

　　iNAATs通常用于分子診斷產(chǎn)生amplicons速度指數(shù)。因此,焦磷酸(PPi)擴(kuò)增子生產(chǎn)的副產(chǎn)品,也是生成的指數(shù)。通過鏈接的PPi指數(shù)生成三磷酸腺苷(ATP)合成,可以使用耐熱性的版本的螢火蟲熒光素酶報(bào)告通過發(fā)出的光放大的程度定量熒光素酶(參見圖1)。因?yàn)榘吞丶夹g(shù)遵循的變化率過程而不是進(jìn)行絕對測量濃度,不同的樣本類型是健壯的和寬容大量的脫氧腺苷三磷酸(螢火蟲luciferases dATP也是襯底)和大量污染ATP和PPi的。 11

　　使用耐熱性的luciferases巴特技術(shù)是至關(guān)重要的,因?yàn)榇蠖鄶?shù)iNAATs 50°、65°C之間運(yùn)行。到目前為止,巴特已經(jīng)集成了幾個(gè)等溫iNAATs基于使用鏈置換聚合酶如Bst DNA聚合酶。 11 某些固有的特異性方法是如此之高,足以跟PPi生產(chǎn)來推斷目標(biāo)分析物的具體放大。

　　巴特記者的光輸出系統(tǒng)非常不同的熒光方法,首先是大量增加光發(fā)射放大收益,其次是快速減少當(dāng)PPi濃度上升就成為抑制熒光素酶反應(yīng)(見圖1)。這種不同尋常的性質(zhì)巴特輸出結(jié)果可以決定什么時(shí)候已經(jīng)完成,而不需要復(fù)雜的或高度敏感的光探測器。光發(fā)射的時(shí)間達(dá)到這一峰值成反比目標(biāo)核酸樣本的數(shù)量。因此,巴特行為定量,time-to-result已被證明是類似于快速PCR系統(tǒng)(參見圖2 a和2 b)。

　　巴特測試可以實(shí)時(shí)跟蹤,使定量分析,和closed-vessel格式執(zhí)行,從而減少污染的風(fēng)險(xiǎn)。獨(dú)特的巴特生物化學(xué)的性質(zhì)意味著結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)使用一個(gè)簡單的(如光探測系統(tǒng)。光電二極管),便于及早發(fā)現(xiàn)和決策不需要昂貴的,高度敏感的光探測裝置(見圖3)。巴特技術(shù)已被證明是更加寬容的處理樣品,由于使用的DNA聚合酶iNAATs由常見抑制劑的影響較小。同樣,可以分析樣品,有固有熒光或者是渾濁的,這對于其他技術(shù)是一個(gè)問題。

　　這些屬性使簡單的協(xié)議建立特定測試作為一個(gè)整體。例如,磁性粒子已被用于捕獲特定的DNA,沒有必要從珠子之前洗提DNA擴(kuò)增聚合酶鏈反應(yīng)。相反,珠子可以直接添加到巴特試劑,可容忍的存在

　　磁珠。寬容意味著樣品制備的這種增強(qiáng)樣品可以簡化,優(yōu)勢資源和具有挑戰(zhàn)性的物理環(huán)境(見表2)。

　　巴特非常適合高通量應(yīng)用程序,使其同樣有用的高度分散的設(shè)置和集中的實(shí)驗(yàn)室需要高通量技術(shù)。硬件也便攜和由電源或電池供電,并在一個(gè)低成本的單位占用空間小,可用于具有挑戰(zhàn)性的環(huán)境,包括non-laboratory設(shè)置。從本質(zhì)上講,巴特被設(shè)計(jì)成筆記本相當(dāng)于以實(shí)驗(yàn)室為基礎(chǔ)的分子診斷系統(tǒng)(參見圖3)。

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