1 儀器與試藥
1.1 儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀;VWD紫外檢測(cè)器;AX205梅特勒-托利多電子分析天平;KQ-300VDB超聲波清洗器。
1.2 試藥 甲醇為色譜純，水為超純水，磷酸(分析純)(為北京化工廠生產(chǎn))。黃芩苷對(duì)照品(批號(hào)110715-200514，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)。開(kāi)光復(fù)明丸三批(批號(hào)6013864;6013865;6013866)，中國(guó)北京同仁堂(集團(tuán))有限責(zé)任公司北京中藥二廠。
2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1 溶液的制備
2.1.1 對(duì)照品溶液 精密稱取黃芩苷對(duì)照品10.06mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取2ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含黃芩苷0.04024mg)。
2.1.2 供試品溶液 取重量差異項(xiàng)下的本品，剪碎，取約0.5g，精密稱定，置50ml量瓶中，加入70%乙醇適量，密塞，超聲處理(功率300W，頻率40kHz)30min，放冷至室溫，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液2ml，置10ml量瓶中，用70%乙醇稀釋至刻度，即得。
2.1.3 陰性樣品溶液 按處方比例，取不含黃芩成分的陰性制劑，同供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液。
2.2 色譜條件[2] 色譜柱：ZORBAX SB-C18 (250mm×4.6mm，5μm)分析柱;流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸(50：50：0.2);檢測(cè)波長(zhǎng)：277nm;流速1.0ml/min;柱溫：40℃。分別取黃芩苷對(duì)照品溶液、供試品溶液(批號(hào)：6013864)、陰性對(duì)照溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)得的分離色譜圖如圖1顯示。結(jié)果表明，黃芩苷與其他成分分離良好，不干擾測(cè)定，測(cè)得理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于2500，黃芩苷峰與相鄰峰的分離度大于1.5，符合要求。
1.黃芩苷
圖1 HPLC色譜圖2.3 線性關(guān)系 精密稱取黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解并制成每1ml含0.2012mg溶液，作為儲(chǔ)備液。分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml置于10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液10μl，注入液相色譜儀，按正文所述色譜條件測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行回歸處理。得黃芩苷回歸方程：Y=29.59708249X-69.11618323, r=0.9991 ,n=6，表明黃芩苷在0.1005~0.8048μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。
2.4 回收率試驗(yàn) 稱取已知含量的同一批樣品(批號(hào)6013864，含量為3.927mg/g)約0.3g(6份)，精密稱定，分別精密加入黃芩苷對(duì)照品溶液(0.04312mg/ml)各25ml，按供試品溶液制備及上述色譜條件操作，依法制備、進(jìn)樣、記錄色譜圖、計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。表1 開(kāi)光復(fù)明丸中黃芩苷加樣回收測(cè)定結(jié)果
2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取供試品(批號(hào)6013864)0.5060g ，照正文所述方法制備供試品溶液，照上述色譜條件，分別在0、1、4、9、20、24h依法測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果峰面積的RSD%=1.2%(n=6)。表明在24h內(nèi)基本穩(wěn)定，本方法有良好的穩(wěn)定性。
2.6 精密度試驗(yàn) 取供試品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，峰面積的RSD%=2.59%(n=6)。
2.7 供試品含量測(cè)定 精密吸取黃芩苷對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，按上述色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中黃芩苷的含量，共測(cè)定3批供試品。結(jié)果見(jiàn)表2。表2 供試品含量測(cè)定結(jié)果
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