1 儀器和試藥
儀器：Agilent 1100（四元泵）高效液相色譜儀；UV3210紫外分光光度計；試藥：甲醇（色譜純），水為純化水，其他試劑均為分析純。補骨脂素和異補骨脂素對照品，供含量測定用，由中檢所提供。樣品：補骨脂藥材購于廣東清平中藥材市場。
2 方法和結果
2.1 紫外吸收波長的研究分別取補骨脂素和異補骨脂素對照品溶液在200~400 nm波長范圍內作光譜掃描，結果補骨脂素和異補骨脂素在245 nm處均有最大吸收，故本含量測定項選擇245 nm作為檢測波長。
2.2 色譜條件色譜柱：IntesilODS-3柱（5 μm,4.6 mm×250 mm），流動相：甲醇水（48：52）；流速：0.8 ml/min。檢測波長：245 nm；柱溫：25℃。補骨脂素和異補骨脂素的tR分別為15.9，18.2 min。
2.3 線性關系考察精密稱取補骨脂素和異補骨脂素對照品各12.5 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，精確吸取上述對照品溶液1，2，3，4，5 ml分別置于25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取上述對照品溶液10 μ１進樣測定。以對照品進樣量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標繪制標準曲線，線性回歸方程分別為：補骨脂素Y=382 4X+0.8,r=0.999 7；異補骨脂素Y=429 2X－4.533 4，r=0.999 9；結果表明：補骨脂素和異補骨脂素在進樣量0.2~1 μg范圍內時呈良好的線性關系。
2.4 對照品溶液和供試品溶液的制備
2.4.1 對照品溶液的制備精密稱取補骨脂素和異補骨脂素對照品適量，加甲醇制成每毫升各含50 μg的混合溶液，即得。
2.4.2 供試品溶液的制備取本品1 g研細，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿適量，加熱提取4 h，放冷，提取液回收至干，殘渣加甲醇使溶解，置于10 ml量瓶中，甲醇少量洗滌容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
2.5 精密度實驗精密吸取供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀，連續(xù)測定6次，計算補骨脂素和異補骨脂素含量。結果表明6次測定結果的平均值分別為1.47，1.72 mg/g，RSD分別為2.5%和2.8%。
2.6 穩(wěn)定性實驗精密吸取供試品溶液10 μl，每間隔1 h測定1次，共測定5次，再過24 h測定1次，結果表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。
2.7 重復性實驗對同一批樣品6份，依法測定，平均含量分別為1.55 mg/g，RSD 2.4%；1.83 mg/g，RSD 2.6%，結果表明本法的重復性較好。
2.8 回收率實驗精密稱取已知含量補骨脂藥材約1 g ，精密添加補骨脂素和異補骨脂素對照品適量，按供試品溶液制備方法制備，依法測定，計算回收率，結果平均回收率分別為97.5%，RSD為2.8%；98.8%，RSD為2.5%（n=5）。
2.9 樣品測定精密吸取供試品溶液10 μl，注入高效液相色譜儀，測定補骨脂素和異補骨脂素含量，結果5批平均含量補骨脂素1.32 mg/g，異補骨脂素1.65 mg/g。
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