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		DNA分子遺傳育種研究受到廣泛重視

　　廣泛開(kāi)展生物技術(shù)、慣例育種及多學(xué)科相結(jié)合的協(xié)同研究，為了不時(shí)滿足國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)對(duì)不同專用花生品種的需求。為花生品種改良提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)理論與技術(shù)在不同物種、不同研究領(lǐng)域的快速發(fā)展與廣泛運(yùn)用，今后在花生分子育種中應(yīng)重點(diǎn)加強(qiáng)以下研究：1將有效分子標(biāo)志和其他遺傳標(biāo)志以及激進(jìn)育種相結(jié)合。充分發(fā)掘蘊(yùn)藏于花生種質(zhì)資源中的遺傳多樣性；高密度遺傳圖譜構(gòu)建和重要性狀基因定位；應(yīng)用DNA 分子標(biāo)志進(jìn)行重要性狀輔助選擇育種；優(yōu)質(zhì)、抗逆基因工程技術(shù)與種質(zhì)創(chuàng)新利用：慣例育種技術(shù)和現(xiàn)代生物技術(shù)有機(jī)結(jié)合促進(jìn)優(yōu)質(zhì)、抗性育種研究等。利用分子標(biāo)志可以在DNA 水平上科學(xué)地選配育種親本，利用與重要目標(biāo)性狀連鎖的分子標(biāo)志可以對(duì)雜種后代進(jìn)行科學(xué)選擇，加快選擇進(jìn)度，提高育種效率，縮短育種時(shí)間。利用植物基因工程技術(shù)，可以打破物種間界線，改良現(xiàn)有花生品種和提供優(yōu)異變異種質(zhì)，加速優(yōu)質(zhì)、抗逆花生新品種（系)選育。

　　其遺傳育種研究一直受到廣泛重視。臨時(shí)以來(lái)，花生是世界范圍內(nèi)廣泛栽培的重要經(jīng)濟(jì)與油料作物。廣大花生育種工作者通過(guò)種質(zhì)資源收集、整理和篩選，運(yùn)用雜交育種和系統(tǒng)育種等慣例育種方式，開(kāi)展了入口型、加工型、油用型、營(yíng)養(yǎng)型及抗逆型等專用花生新品種選育工作，取得了顯著成果。但是慣例育種方法普遍存在育種周期長(zhǎng)、對(duì)目標(biāo)單株的選擇效率低、利息高等缺點(diǎn)，制約了花生育種的深入開(kāi)展。近年來(lái)，隨著分子遺傳學(xué)研究的不時(shí)深入，為花生遺傳改良提供了強(qiáng)有力的技術(shù)手段，展示出分子育種的誘人前景。

　　而種質(zhì)資源的遺傳多樣性及其親緣關(guān)系信息非常重要，利用分子標(biāo)志技術(shù)研究種質(zhì)資源遺傳多樣性，對(duì)科學(xué)配置雜交組合具有重要的指導(dǎo)作用。目前，研究人員利用RA PDSSRAFLP等分子標(biāo)志對(duì)花生種質(zhì)資源多樣性進(jìn)行了深入分析,從種質(zhì)資源中發(fā)掘和利用優(yōu)異基因是實(shí)現(xiàn)突破性育種的關(guān)鍵。均可檢

　　其中7條發(fā)生多態(tài)性片段，RA PD標(biāo)志Subramanian等利用48條RA PD引物檢測(cè)70份不同基因型的花生品種。占總引物的14.6%姜慧芳等應(yīng)用RA PD技術(shù)對(duì)7個(gè)花生品種進(jìn)行了分析，所用的83個(gè)隨機(jī)引物中，13個(gè)引物的擴(kuò)增產(chǎn)物顯示出不同品種之間的多態(tài)性。

　　揭示了不同花生品種具有較高的多態(tài)性。韓柱強(qiáng)等利用11對(duì)SSR引物對(duì)24個(gè)栽培花生品種分析,SSR標(biāo)志Hopk等應(yīng)用6個(gè)多態(tài)性SSR引物,19份被鑒定的栽培花生種質(zhì)中出現(xiàn)了17條特征條帶。其中4對(duì)檢測(cè)到明顯的多態(tài)性,根據(jù)擴(kuò)增結(jié)果可以將24個(gè)品種中的21個(gè)相互區(qū)分。最近,洪彥彬等采用110對(duì)SSR引物分析28份花生栽培種之間的遺傳差別,其中有46對(duì)引物在不同品種間檢測(cè)出2-9個(gè)等位基因，SSR聚類結(jié)果與根據(jù)形態(tài)特征的分類結(jié)果基本一致。

　　其中28對(duì)引物有多態(tài)性，累計(jì)檢測(cè)到111個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，每條引物平均有3.96個(gè)多態(tài)性條帶：進(jìn)一步利用AFLP引物基本上將44份栽培種花生分為疏枝亞種和密枝亞種。陳強(qiáng)等對(duì)32個(gè)來(lái)源于中國(guó)不同產(chǎn)地的花生品種進(jìn)行了AFLP指紋圖譜及相似性聚類分析，結(jié)果標(biāo)明，所有供試花生品種的遺傳相似性為35%45%相似性水平上分為3個(gè)群，標(biāo)明中國(guó)花生品種存在明顯的遺傳多態(tài)性。AFLP引物He等首次在花生上利用AFLP技術(shù)檢測(cè)到豐富的多態(tài)性,隨后利用64對(duì)AFLP引物檢測(cè)花生的栽培種。

　　可在分子水平上為生產(chǎn)中品種純度鑒定和品種知識(shí)產(chǎn)權(quán)維護(hù)提供依據(jù)。李雙鈴等利用AFLP標(biāo)志對(duì)10個(gè)山東花生主栽品種進(jìn)行了分析，利用花生品種間的DNA 多態(tài)性構(gòu)建分子指紋圖譜。9對(duì)引物組合共擴(kuò)增出55條多態(tài)性條帶，并且至少兩對(duì)引物組合的配合可將這10個(gè)品種完全區(qū)分開(kāi)。劉冠明等從64對(duì)SSR標(biāo)志引物中篩選出4對(duì)，為南方花生主產(chǎn)區(qū)20個(gè)品種建立了指紋圖譜，該圖譜能使19個(gè)品種相互區(qū)分。

　　花生重要性狀分子水平的研究則相對(duì)落后。截至目前，相對(duì)于水稻、油菜等其他作物而言。關(guān)于花生重要性狀的分子標(biāo)志和QTL定位主要集中在抗性方面。雷永等利用抗、感黃曲霉侵染的花生品種為親本配制雜交組合中花5號(hào)×J11以其F2分離群體為研究材料，采用AFLP技術(shù)和BSA 分析方法，獲得了與花生黃曲霉菌侵染抗性連鎖的2個(gè)分子標(biāo)記，標(biāo)志與抗性間的遺傳距離分別為8.8cM和6.6cM并進(jìn)一步將其中的一個(gè)與抗性連鎖的AFLP標(biāo)志轉(zhuǎn)化為更為實(shí)用的SCA R標(biāo)志，該標(biāo)志與花生黃曲霉侵染抗性間的遺傳距離為6.5cM任小平等利用抗、感青枯病的花生品種為親本配制雜交組合中花5號(hào)×遠(yuǎn)雜9102構(gòu)建重組近交系，采用AFLP技術(shù)和BSA 分析方法，獲得2個(gè)與花生青枯病抗性連鎖的分子標(biāo)志，標(biāo)志與抗性間的遺傳距離分別為8.12cM和11.46cMHerselman等利用AFLP標(biāo)志，采用BSA 法獲得花生矮化病毒病抗性基因連鎖的分子標(biāo)志，并利用AFLP標(biāo)志構(gòu)建了花生5個(gè)連鎖群，第一連鎖群上得到一個(gè)與抗性基因連鎖的標(biāo)志，距離僅為3.9cM

　　目前多用于雜交后代的鑒定。殷冬梅等利用RA PD技術(shù)，分子標(biāo)志輔助選擇在花生中應(yīng)用較少。對(duì)栽培種豫花4號(hào)與花生屬野生種A.villosa雜交后代9722F5進(jìn)行了分子標(biāo)志鑒定，結(jié)果標(biāo)明，從60個(gè)隨機(jī)寡核苷酸引物中篩選出具有多態(tài)性的引物27個(gè)，其中一個(gè)引物（引物S364能檢測(cè)到來(lái)自野生種A.villosaDNA 特異性片段，說(shuō)明野生種的某條染色體或某個(gè)部位轉(zhuǎn)入栽培種中。吳蘭榮等利用花生野生種A.cardenasii與栽培種鐵嶺四粒紅雜交，并以染色體加倍獲得雜種后代，經(jīng)多代自交選擇獲得新種質(zhì)材料8126應(yīng)用RA PD分子標(biāo)志技術(shù)鑒定8126從76個(gè)引物中篩選出3個(gè)特異引物（OPE2OPF8OPF208126中穩(wěn)定地?cái)U(kuò)增出野生親本的特異譜帶，標(biāo)明8126整合了野生親本的遺傳物質(zhì)，RA PD特異譜帶可以作為8126中野生親本A.cardenasii特異遺傳標(biāo)志

　　提高花生抗性、改良品質(zhì)的一種有效手段，可以達(dá)到種質(zhì)創(chuàng)新利用的目的并有望進(jìn)一步育成抗蟲、抗病、抗逆和優(yōu)質(zhì)花生新品種?？剐曰蜣D(zhuǎn)化目前，花生遺傳轉(zhuǎn)化的抗性基因主要包括抗蟲基因、抗病基因、抗旱基因等?；ㄉ蠎?yīng)用的天然抗蟲基因主要有Bt基因和CpTI基因。徐平麗等將抗蟲基因CpTI轉(zhuǎn)入花生，經(jīng)誘導(dǎo)分化獲得轉(zhuǎn)基因再生植株。PCR檢測(cè)及Southern雜交標(biāo)明，外源基因CpTI已整合到大部分再生花生植株的基因組中；棉鈴蟲喂飼試驗(yàn)表明，轉(zhuǎn)基因的花生植株具有一定的抗蟲性。番茄斑枯萎病（TswV核衣殼蛋白基因、花生條紋病毒(PStV外殼蛋白基因及幾丁質(zhì)酶基因是目前研究最多的抗病基因。Yang等用番茄斑枯萎?。═swV核衣殼蛋白質(zhì)基因包裹的微彈轟擊花生，獲得轉(zhuǎn)基因植株。轉(zhuǎn)基因花生后代在自然侵染病毒的情況下,利用基因工程技術(shù)將外源基因?qū)牖ㄉ蚪M。與非轉(zhuǎn)基因的花生比擬，斑萎病的發(fā)病率降低。Higgin等將兩種形式的PStV外殼蛋白基因(一是發(fā)生移碼的不能正常翻譯的全長(zhǎng)序列CP2二是氨基端截短但可編碼CP基因CP4分別轉(zhuǎn)入花生胚性愈傷組織，并通過(guò)潮霉素篩選獲得抗性轉(zhuǎn)基因植株、攜帶CP2和CP4轉(zhuǎn)基因植株均未檢測(cè)到蛋白質(zhì)表達(dá)，但都具有PStV抗性。最近，Bhatnagar-Mathur等將由rd29A 基因的脅迫誘導(dǎo)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的擬南芥轉(zhuǎn)錄因子基因DREB1A 導(dǎo)入干旱敏感型花生，檢測(cè)到有DREBlA 表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植株生長(zhǎng)正常，并具有明顯的干旱誘導(dǎo)抗性。

　　控制子粒油酸、亞油酸含量和二者比值的關(guān)鍵酶。利用反義轉(zhuǎn)基因技術(shù)和RNA i基因緘默技術(shù)，品質(zhì)改良基因轉(zhuǎn)化油酰去飽和酶FA D2催化油酸在碳12位脫氫生成亞油酸?？捎行б种艶A D2基因的轉(zhuǎn)錄，提高油酸含量。目前國(guó)外許多實(shí)驗(yàn)室都在開(kāi)展花生脂肪酸含量和組成改良方面的研究。Yin等構(gòu)建了含有FA D2基因激進(jìn)區(qū)的hpRNA 基因緘默表達(dá)載體。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化法獲得了2l株轉(zhuǎn)基因植株，檢測(cè)結(jié)果標(biāo)明，轉(zhuǎn)基因植株種子油酸含量較非轉(zhuǎn)基因植株明顯增加，其中增加最高的油酸含量可達(dá)總脂肪酸含量的70%而非轉(zhuǎn)基因植株種子油酸含量只增加到37.93%

　　國(guó)內(nèi)外在花生分子標(biāo)志、轉(zhuǎn)基因等現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域已取得較大研究進(jìn)展，目前。但從國(guó)際范圍看，花生分子育種的研究明顯落后于其他作物，許多問(wèn)題有待于進(jìn)一步研究和解決。例如，花生分子標(biāo)志技術(shù)多限于種質(zhì)資源遺傳多樣性分析，而重要農(nóng)藝性狀QTL定位、分子標(biāo)志輔助選擇研究尚未深入開(kāi)展，某些技術(shù)體系還處于探索階段；雖然花生轉(zhuǎn)基因研究進(jìn)展較大，但生產(chǎn)中真正推廣應(yīng)用的抗性品種尚不多見(jiàn)。

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