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| FISH探針用于檢測遺傳缺陷的范圍不斷提高 | |||
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近日，被檢測出所有24條染色體同時在中期染色體用只有五熒光標簽。4,5例如，使用三個熒光標簽，以確定七個不同的間期核中染色體非整倍體第27頁的圖A所示。當每個組合由不同比例的每個熒光團的標簽，檢測到的目標的數(shù)量是有限的能力來區(qū)分不同的標簽的比例。例如，8條染色體被再現(xiàn)地檢測到只用兩個熒光團標記。
FISH探針用于檢測遺傳缺陷的范圍不斷提高例如，組成的串聯(lián)重復的人DNA序列，如著絲粒α-衛(wèi)星序列的探針通常用來識別或列舉具體的染色體?？捎糜诳寺。毺氐男蛄械腄NA區(qū)域的探針來檢測的小區(qū)域或位點的基因組。這些克隆的混合物可用于染色，或“漆”，大內的整個染色體。這種染色允許分析以及鑒定中期細胞的補充和易位染色體數(shù)目。這些探頭所提供的信息，使他們的價值在評估的應用范圍，包括產前/圍產期診斷，遺傳異常，癌癥的研究，髓系疾病的診斷，以及罕見的細胞分析基因組。
胎教/圍產期應用染色體異常，如唐氏綜合征，是迄今為止最常見的遺傳異常與新生兒出生缺陷相關。傳統(tǒng)的細胞遺傳學帶狀中期染色體上一直是標準的為婦女提供產前測試胎兒染色體異常的風險增加。細胞遺傳學檢查染色體非整倍體和結構異常，但是，這種技術需要一個大標本量，文化胎兒細胞數(shù)天，隔離中期利差，和訓練有素的技術人員，對結果進行分析。此外，該方法通常需要超過一周內完成。相比之下，魚進行一組染色體特異性探針只涵蓋最常見的非整倍體（即性染色體或染色體為13，18，和21三體異常），具有很高的靈敏度和特異性，可以檢測到這些主要的染色體缺陷未培養(yǎng)羊水細胞中少于24小時。6因此，在某些臨床情況下，最常見的非整倍體的快速檢測，間期核FISH提供了一個初始的快速屏幕上的完整的細胞遺傳學評價。從FISH分析的結果可以用于在一個繁忙的細胞遺傳學實驗室的情況下，通過將傳統(tǒng)的細胞遺傳學方法進行分析的列表的頂部通過FISH陽性標本的優(yōu)先級。
使用直接標記DNA probes.Standard的細胞遺傳學分析的六個步驟進行FISH魚在圍產期的設置，是用來檢測結構和數(shù)值的染色體異常。圍產期測試來檢測小染色體缺失往往錯過了常規(guī)細胞遺傳學，它可以起到拋磚引玉的作用。這樣的微缺失綜合癥測試包括檢測缺失7號染色體上，都與威廉姆斯綜合征和22號染色體上，都與DiGeorge氏velocardiofacial綜合的綜合征。
癌癥應用FISH迅速地測試間期和中期染色體缺陷的能力使得它特別實用于癌癥的研究。在固體腫瘤，常規(guī)細胞遺傳學很少使用，因為很難獲得中期分裂的腫瘤細胞進行有絲分裂的可能并不代表。其他分子生物學技術，如PCR和南方，北方，西方的分析，需要提取的組織。提取程序凈正常和異常細胞，所以靈敏度較低的和定量的不可靠的比FISH探針。
FISH允許細胞通過細胞分析，從而提供了更敏感的和可靠的評估染色體非整倍體，基因擴增和缺失，染色體易位。一個可靠的測定樣品中的擴增的基因是否經?？赡苤挥?0?50個細胞與評價。
HER-2/neu基因擴增是乳腺癌復發(fā)和生存的一個重要的，獨立的預后指標。HER-2/neu基因擴增和過表達與預后不良相關 - 一個較短的無病期以下待遇和總生存期較短。的研究還表明，HER-2/neu過度表達作為標記的腫瘤抗化療和激素治療是有用的。因此，對于乳腺癌的管理，HER-2/neu基因擴增有可能預測對治療的反應和確定治療方法的選擇。
雖然HER-2/neu基因擴增HER-2/neu蛋白的表達和免疫組織化學（IHC）的Southern印跡分析經常被用來定量基因擴增，每個呈現(xiàn)技術和解釋性的限制。免疫組化的結果隨使用不同的抗體和組織處理，使用不同標準陽性和使用不同的程序。按等。HER-2/neu的一些抗體的性能特征有從6至80％的靈敏度，由于這些固有的技術困難，IHC及Southern blot分析還沒有被標準化，得到一致的結果。
魚是一種替代技術，沒有Southern雜交和免疫組化技術和解釋性的限制。它可靠地，準確地表示基因擴增。HER-2/neu基因擴增對于定量的魚，明顯的優(yōu)勢是，它直接評估水平放大試樣中的腫瘤細胞，而保留其形態(tài)特征。
一組研究人員最近分析了隊列乳腺癌標本通過各種方法，發(fā)現(xiàn)魚比Southern blot分析更敏感和更準確的比北部和Western blot分析，并有更大的適用性和石蠟包埋組織中的靈敏度比IHC 。對最好的方法（IHC冰凍切片），石蠟切片的魚的敏感性為97.2％，而其特異性為100％。
髓系疾病
髓性疾病 - 包括慢性粒細胞性LEU kemia（CML），急性髓細胞白血?。ˋML），增生myelopro的障礙（MPD），骨髓增生異常綜合征（MDS） - 常見的染色體異常的三體8。因此，存在該三體綜合征，是醫(yī)師的預后價值。Vysis CEP 8探頭（直接標記染色體枚舉包含在8號染色體著絲粒區(qū)域的α-衛(wèi)星DNA特異性探針）分析細胞間期和中期的魚比較標準細胞遺傳學分析在一項多中心，雙盲，控制研究。四個實驗室提供了共364歸檔骨髓標本檢測。本研究的結果，示于表I，體現(xiàn)FISH技術的可靠性。
在管理許多血液系統(tǒng)惡性腫瘤，骨髓移植（BMT）是一個重要的治療策略成功固化。移植后，以檢測是否存在克隆腫瘤細胞遺傳學，以評估植入的能力是重要的。雖然許多患者一個穩(wěn)定的嵌合狀態(tài)演化之間的供體和受體的骨髓，在別人不穩(wěn)定的一個形式和最終惡性腫瘤復發(fā)，越來越多的出現(xiàn)的宿主細胞在骨髓或外周血循環(huán)。
大約一個半所有異源BMTS的性別不匹配?？焖俸蜏蚀_的骨髓細胞的遺傳性別鑒定提供了一個簡單的方法，用于評估的骨髓供體/受體狀態(tài)。雖然一些方法目前用于本次評估，通過列舉染色體X和Y FISH探針可以提供最快速，最容易量化的結果。
的試點研究使用Vysis直接標簽CEP X SpectrumOrange / Y SpectrumGreen的DNA FISH探針檢測，進行評估骨髓標本誰經歷了一個異性骨髓移植139例。8間期FISH分析的臨床靈敏度估計為100％。常規(guī)細胞遺傳學分析的估計為77％，并在某些情況下，的分析被卡住過少。誰經歷了同性骨髓移植148例，臨床特異性間期FISH分析，估計是100％。測定結果顯示，高重現(xiàn)性好，即使在實驗室。
表一，試點研究的結果比較Vysis CEP 8（染色體枚舉探頭）的FISH相間分析與標準檢測8號染色體三體細胞遺傳學分析。
罕見的細胞分析FISH已被廣泛地使用在嘗試識別進行產前診斷在母體血液中的胎兒細胞。羊膜穿刺或絨毛取樣（CVS）的細胞，胎兒遺傳分析材料的傳統(tǒng)來源，對胎兒的風險小，但意義重大的犧牲。如果胎兒細胞可以得到，而不是從母體血液中，可能對胎兒無創(chuàng)產前基因檢測。比羊膜穿刺術或CVS安全，這樣的測試，可能會被用于更大數(shù)量的懷孕。
通過篩選使用魚或PCR與探針作為標記的Y染色體的男性胎兒起源的母體血液樣本，研究人員報告值范圍從一個胎兒細胞在10 5 10 9核母細胞之一。9,10其他結合IHC檢測胎兒血紅蛋白11 FISH（熒光免疫表型和間期細胞遺傳學，腫瘤的調查作為一種工具）作為一種手段，確定女性胎兒細胞的技術稱為小說。
有些報告還引用魚使用在白血病微小殘留病檢測。12,13不同于逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR），這需要復雜完整的RNA提取，魚提供了一個細胞細胞分析材料簡單地固定在顯微鏡幻燈片。因此，F(xiàn)ISH技術是一種簡單的方法量化疾病標本中存在的水平。
實踐思考作為診斷行業(yè)繼續(xù)尋找創(chuàng)造性的方式來控制成本，魚很可能發(fā)揮越來越大的作用。魚提供的能力，在大多數(shù)情況下，獲得最終的結果迅速通過采用一個簡單的檢測策略，可以解釋的基本的技術人員經過適當?shù)呐嘤枴?/span>
FISH分析的自動化，將增加檢測吞吐量，減少技術人員的時間，除去運營商的偏見，并簡化復雜的結果的解釋?；脽羝詣又苽浜腿旧强赡艿?。圖像處理方法和儀器間期核中的染色體自動枚舉已經得到證實。當市售的，自動化的“點計數(shù)”將會減輕繁瑣的顯微鏡觀察小時的技術人員和消除由于疲勞和誤解或計算標準不一致的應用程序的錯誤。類似那些專為半自動分析常規(guī)染色染色體的核型分析系統(tǒng)允許識別熒光帶狀染色體。這些能力，一旦整合成一個完整的系統(tǒng)，將允許的交鑰匙FISH分析系統(tǒng)。
結論魚在臨床研究實驗室的效用越來越大。CAP今天在最近的文章中，亞瑟Brothman，博士，猶他健康科學中心，國家大學的細胞遺傳學實驗室主任，“如果魚是不是提供一些遺傳學評估，病人不給予什么，我相信是標準的護理。“ 14幾個驅動因素都使FISH檢測進入主流的做法，在病理實驗室。這些包括克隆的獨特的序列探針的方法的改進，標記核酸，簡化檢測程序，以允許自動滑動染色，信息密度高，通過使用多色事件的檢測，復雜的圖像分析工具，以及增加的臨床重要性的知識固體腫瘤基因分型診斷，預后和監(jiān)測。
承認作者非常感謝H.許萍博士沃爾特·王，博士;戴夫巷，博士;拉里·莫里森博士;烏韋·穆勒博士，彼得的Osella;約翰Proffitt，博士;克里斯Shasserre;和Doug塔龍博士的協(xié)助下， ，Vysis公司
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