購買時請注意選擇相應的產品名稱
| 新興的體外診斷技術熒光原位雜交 | |||
|---|---|---|---|
|
熒光原位雜交（FISH）是一種新興的體外診斷技術非常復雜的生物標本 - 如血液，羊水，和實體瘤 - 遺傳異常的臨床評價和表征。魚類病理學家和遺傳學家的特殊價值，促進廣泛的分子遺傳事件，如非整倍體，基因擴增，基因缺失，染色體易位，是很難檢測，染色體核型分析，PCR或LCR的表征。魚為主的體外診斷有可能顯著提高癌癥患者的生存可能早期發(fā)現惡性腫瘤和腫瘤手術后的更準確的預后評估。魚體外診斷也可以適用于產前和產后的遺傳分析。此外，該技術是特別有用的單個單元中的同時檢測多個基因的異常，有可能節(jié)省分析時間，并限制試樣的要求。
魚用核酸探針 - 段標記的DNA綁定，或“雜交”的標本的DNA與目標 - 通常固定在玻片。與熒光分子標記的探針，通過使用熒光顯微鏡的探針 - 靶雜交未能識別?；旌蟿恿M一步分析與計算機成像設備。由于兩個互補的DNA鏈之間發(fā)生雜交，標記的探針可用于檢測遺傳異常，產前紊亂，癌癥和其他遺傳疾病提供有價值的信息。與其他分子的DNA為基礎的測試，這需要細胞裂解釋放的核酸進行分析，FISH原位允許的DNA分析，也就是在其原生，細胞核內的染色體的形式。該屬性允許單個細胞的染色體和基因的分析。
魚的一個關鍵優(yōu)勢是它的能力為目標，只有那些感興趣的基因序列。1986年，喬·格雷博士丹Pinkel，博士，同時在勞倫斯·利弗莫爾實驗室，發(fā)現適當的封閉魚使用克隆的人類基因或獨特的DNA序列區(qū)域的DNA序列，列入抑制穿插重復DNA序列雜交（所以所謂的“垃圾DNA”）散落在整個基因組。這種抑制在很大程度上消除了非特異性信號。這一發(fā)現是由美國加州大學的專利獨家許可Vysis公司（伊利諾斯Downers Grove）。
直接由共價結合的探針的熒光團標記的DNA探針的發(fā)展進一步簡化的技術：舊的檢測方法依賴于標記的探針-靶DNA雜間接結合的信號產生基團（如異硫氰酸熒光素FITC]抗生物素蛋白）無信號產生的DNA探針上的配位體（如生物素）（圖1）。間接方法是更復雜的，需要額外的步驟，往往有更多的非特異性信號，由于異硫氰酸熒光素-親和素復合物的固有粘性的。例如，在最近的研究中，測量HER-2/neu在乳腺癌標本的擴增，直接標記和間接標記的探針的比較發(fā)現了一個方法率99.3％的速度相比，與直接標記的探針只有79.7％的間接標記的探針。1因此，Pinkel和灰色發(fā)明的直接標記的探針的組合，有可能成為一種常規(guī)的技術，染色體異常的臨床鑒定FISH。
詞匯表α-衛(wèi)星DNA：約171個堿基對的序列，發(fā)現在每個人染色體的著絲粒區(qū)域的不同副本的串聯陣列。非整倍體：一個正常的染色體，較少量的（單體性）或更高（例如，三體綜合征[3]）比正常的偏離。現場計數：計數的獨特的熒光信號，或“斑點”，所產生的特定的染色體雜交時的α衛(wèi)星地區(qū)的FISH探針。
程序;魚，用直接標記的探針，是一個簡單的程序，包括六個基本步驟（圖2）。樣品前處理，第一個步驟，它涉及到與靶DNA序列變性結束。接著，對探針施加到目標區(qū)域，目標DNA和探針雜交。目標雜交后，洗滌以除去非特異性結合的探針。最后，染液施加雜交的結果的可視化。
在這樣一種方式，該探針具有與靶DNA樣本的形態(tài)被保留時，必須將樣品制備。組織類型，固定，樣品嵌入過程影響變性前的預處理必要的類型。對于淋巴細胞，簡單的變性條件下，如高溫和低的鹽或堿，是足夠的。福爾馬林固定的石蠟包埋組織，但需要更多的步驟，包括脫蠟和酶和/或化學處理，以使探針與靶DNA。雜交和洗參數是相當標準的，但在某些試驗中，必須改變以適應某些探針的復雜性和特殊性。
使用五彩探頭可同時檢測多個基因魚在一個單一的核事件。甲更大數量的熒光基團，可以在直接標記的探針一起使用，比在間接標記的探針。2 Multievent篩選能識別檢體的克隆性質以及中期和間期細胞中的染色體重排。此外，允許列入探針雜交的控制位點（與測試位點），同時目標檢測，可以提高檢測的準確性。使用這些探針，它可以監(jiān)視每個細胞核內雜交的成功或失敗。
有幾種方法，multievent在FISH檢測。2一種方法是使用標記的探針雜交中檢測到的每個目標用不同的光譜上不同的熒光基團。通過使用此方法至少有7個不同的染色體上已被同時檢測到2的另一種方法，稱為顏色編碼，單獨和組合使用不同的熒光團比用于標記探針的熒光團的數目，找出染色體目標3通過結合熒光團2 N 1的目標，可以檢測到（N =熒光標簽）。
|
| 上一篇：烷基磺酸有關的潛在風險 | 下一篇：FISH探針用于檢測遺傳缺陷的范圍不斷提高 |
|---|
無法在這個位置找到： xy/left.htm
2013-2019@ 河南尋夢電子商務有限公司版權所有
豫ICP備17046142號-2