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| 鏈霉抗生物素蛋白的結合容量的測定使用 | |||
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放射性氚含量：生物素最早的類型的鏈霉抗生物素蛋白的結合容量的測定使用125 I-，14 C-或3 H-標記的生物素作為示蹤劑。由于這些化驗簡單，他們仍然被廣泛使用的今天。放射性物質的比其他的檢測手段具有一些明顯的優(yōu)勢，因為它會導致只有很輕微的變化的標記抗原（一個氚標記的生物素作為非放射性的生物素分子的大小具有相同的）的結構，容易量化，并且是簡單的檢測。2，這使得這些材料的使用非常方便的小分子的結合反應的研究。此外，一個大的生物素化的分子可以被放射性標記的，很容易地確定為較高分子量的配位體，如免疫球蛋白鏈霉親和素包被的微球的結合能力。然而，決定使用一個看似簡單的放射性檢測作為主要的生物素結合容量檢測之前，用戶應該考慮低比活動等復雜因素，甚至125 I標記分子的不穩(wěn)定性質一些放射性修改分子;使用這種測試所涉及的監(jiān)管壓力和約束，需要專門的檢測設備。
有兩種常用的方法，這種類型的測定。第一種方法是用過量的放射性標記的生物素結合能力計算中孵育不同量的微球。也許更常見的方法是用一定量的微球生成Scatchard圖孵育不同量的放射性生??物素。一個版本的Scatchard圖是典型的方法進行定量細胞表面上的受體數（即，結合位點），因此，可以進行修改，用于quantifiying的微球表面上的結合位點的數目（請參閱圖2）。我們的方法，以該測定孵育不同量恒定量的氚標記的生物素與鏈霉親和素包被的磁性微球，總是在過量的生物素結合位點上的微球的化學計量計算的數。微球，然后水洗，并直接從微球中，用閃爍計數測定放射活性。實際的結合能力是一個轉換為每分鐘的計數除以計數增加每分鐘的總生物素結合的生物素的分數。氚標記的生物素活性的更精確的測量，可以檢查運行檢測上清液每分鐘的計數，確保這個計數，再加上，微球，加起來為原體積的氚標記的生物素的每分鐘計數。實施例的Scatchard圖，通常用于定量細胞表面上的受體的數量。
 當測量放射性的鏈霉親和素包被的磁性微球的結合能力時，我們遇到了一些有趣的考慮因素。我們發(fā)現，提供更廣泛的基微球大小分布，如磁性粒子由幾個主要供應商，可導致不準確和低結合容量值。據認為，這是由于“罰款，”或更小的顆粒，不拉磁鐵在相同的時間量作為微球的主要種群。這些罰款理論上可與生物素結合，但不能檢測到閃爍計數微球顆粒，從而降低表觀結合容量。解決這個誤差源的方法之一是使用一個更強大的磁鐵，有能力拉微球有一個較低的量的氧化鐵，是罰款的情況。 |
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