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DNA芯片已被用于醫(yī)藥研究和發(fā)展 | |||
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微陣列可以分析大量的生物分子,使用少量的物質(zhì),空間分開,在基片上(例如,塑料,玻璃,半導(dǎo)體)。在芯片表面沉積或合成的生物材料,包括核酸,蛋白質(zhì),肽,碳水化合物。用于放置到芯片表面材料的方法依賴于身體斑點(diǎn),壓電沉積,并在原位合成(主要是DNA)。DNA的合成方法包括光刻和電化學(xué)合成。對(duì)照品網(wǎng)
對(duì)于超過(guò)十年的時(shí)間里,芯片,特別是那些含有DNA芯片已被用于醫(yī)藥研究和發(fā)展。這種裝置利用人類基因組測(cè)序計(jì)劃的努力,并已顯示出巨大的效用,在理解基因表達(dá),單核苷酸多態(tài)性(SNP)和功能基因組學(xué)。大多數(shù)基因芯片的研究的最終目標(biāo)是開發(fā)更好的藥物遺傳學(xué)通過(guò)一個(gè)詳細(xì)的了解。此外,微陣列用于體外診斷領(lǐng)域,來(lái)診斷疾病,確定個(gè)人誰(shuí)是易患某些疾病,并確定藥物反應(yīng)型材。后者的問題是及時(shí)考慮到近期發(fā)生的事件,涉及Vioxx和Celebrex的 大多數(shù)討論微陣列技術(shù)研究應(yīng)用和制造方法。雖然這篇文章會(huì)觸及這些話題,將主要側(cè)重于檢測(cè)方法,特別是新興的電化學(xué)技術(shù)。本文還將討論為什么某些電化學(xué)檢測(cè)器(ECD)方法應(yīng)使開發(fā)更小,更昂貴的檢測(cè)系統(tǒng),并提供更好的性能。IVD制造商必須保持記住芯片繼續(xù)有一個(gè)越來(lái)越重要的作用,在分子診斷等因素。
檢測(cè)方法分析DNA微陣列上的雜交事件的最常用的方法是熒光。然而,許多不同的方法已被證明包括其他的光學(xué)技術(shù)。一些技術(shù)使用的是連接到探針樣品中,樣品制備過(guò)程中的光標(biāo)簽。其他深?yuàn)W的方法也得到了發(fā)展,如表面等離子體共振,原子力顯微鏡,以及技術(shù),雜交后的措施大規(guī)模增加(例如,石英晶體微量天平,懸臂)2-8雖然每種方法都有其優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),唯一的技術(shù)已經(jīng)在商業(yè)上取得成功的熒光。
ECD是這樣的一個(gè)可供選擇的方法,在實(shí)驗(yàn)室中已被證實(shí),但尚未在商業(yè)環(huán)境中成功地實(shí)施。這是由于復(fù)雜的ECD計(jì)劃和相應(yīng)的復(fù)雜儀器的要求。但是,也有ECD的方法,很容易實(shí)現(xiàn),同時(shí)保持其優(yōu)于熒光。
在傳統(tǒng)的光學(xué)系統(tǒng)中的熒光輸出測(cè)量監(jiān)測(cè)從激發(fā)光束90度,使用昂貴的系統(tǒng),以減少或消除來(lái)自檢測(cè)器的激勵(lì)頻率。對(duì)于芯片,相似類型的光學(xué)系統(tǒng)注冊(cè)成立,以獲得增強(qiáng)的信號(hào),同時(shí)降低背景光激發(fā)光束。正因?yàn)槿绱?,需要昂貴的光學(xué)系統(tǒng),具有更好的光柵/掃描系統(tǒng),使用激光束。的激光束的寬度越小,分辨率越高的掃描。對(duì)照品網(wǎng)當(dāng)芯片的光斑尺寸與更高密度變小,這個(gè)問題就變得至關(guān)重要。對(duì)于包含一個(gè)以上的熒光團(tuán)標(biāo)記的微陣列中,多個(gè)激光頻率需要用附加的光學(xué)元件。所有這些要求的任務(wù)大型和昂貴的微陣列分析的掃描儀。
微陣列的應(yīng)用:在一個(gè)典型的基因表達(dá)的基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)中,RNA是從組織或細(xì)胞中分離,轉(zhuǎn)換為cDNA用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)。RNA聚合酶放大樣品中的核苷酸的存在下,其中一些已被化學(xué)與熒光分子。甲數(shù)的熒光素標(biāo)記的核苷酸引入到RNA聚合酶在擴(kuò)增過(guò)程中產(chǎn)生的。后,經(jīng)擴(kuò)增和標(biāo)記的RNA通過(guò)化學(xué)手段被分片,并暴露到陣列,在陣列上的互補(bǔ)序列雜交。在特定的點(diǎn),作為衡量一個(gè)熒光掃描儀,熒光標(biāo)記的RNA綁定到一個(gè)特定的互補(bǔ)DNA目前在該網(wǎng)站上。
基因表達(dá)研究,在其中雜交的電化學(xué)測(cè)量的熒光的情況下是類似的。然而,隨著ECD,沒有附加標(biāo)簽或標(biāo)簽產(chǎn)生一個(gè)電流被使用。例如,化學(xué)與生物素的核苷酸可用于在擴(kuò)增過(guò)程中。一旦它們被納入擴(kuò)增的RNA雜交芯片,抗生物素蛋白 - 酶結(jié)合物暴露的芯片,然后通過(guò)暴露于酶的底物,導(dǎo)致在可測(cè)量的電流后,底物周轉(zhuǎn)。本文來(lái)源于www.brmmt.cn
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