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		免疫學(xué)基本常識(shí)：抗原、抗體及單克隆抗體

　　人或動(dòng)物可以依靠自身的能力抵御某些疾病的侵襲，也有一些疾病可以通過(guò)機(jī)體自身調(diào)控而自愈，這是因?yàn)闄C(jī)體內(nèi)部存在一個(gè)免疫系統(tǒng)。免疫系統(tǒng)是由中樞免疫組織（骨髓、胸腺、消化系統(tǒng)免疫組織）和外周淋巴組織（淋巴結(jié)和脾臟）的免疫活性細(xì)胞（B淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞），以及由它們產(chǎn)生的多種淋巴因子和抗體所組成。免疫系統(tǒng)對(duì)外來(lái)物質(zhì)產(chǎn)生一系列反應(yīng)的過(guò)程稱為免疫，而這種反應(yīng)本身則稱為免疫應(yīng)答。能夠在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)稱為抗原，免疫應(yīng)答的結(jié)果則是刺激機(jī)體產(chǎn)生與抗原相對(duì)應(yīng)的特異性抗體和引起細(xì)胞免疫。

　　由于免疫應(yīng)答同時(shí)取決于機(jī)體，而不僅是進(jìn)入機(jī)體的物質(zhì)，所以抗原的定義是相對(duì)的。由此，按照免疫應(yīng)答的效果可以將抗原分為完全抗原和半抗原：完全抗原是指能夠直接誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的一類物質(zhì)。完全抗原的分子量都大于5000，其化學(xué)成分多為蛋白質(zhì)或脂多糖，其它如脂蛋白，糖蛋白，多糖體，多肽，核酸等也都是完全抗原。半抗原能與抗體特異性結(jié)合，但不能激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體，必須與蛋白質(zhì)（載體）結(jié)合后進(jìn)入機(jī)體，才能產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答。大分子的半抗原在體外能與對(duì)應(yīng)的抗體結(jié)合發(fā)生可見反應(yīng)（凝集、沉淀），小分子的半抗原能與對(duì)應(yīng)抗體結(jié)合而不出現(xiàn)可見反應(yīng)。此外，抗原還可以按照自身的物質(zhì)屬性分為可溶性（毒素、異種蛋白）或顆粒性（細(xì)菌、細(xì)胞）抗原，或按臨床意義分為外源性和內(nèi)源性抗原。

　　抗體是在抗原刺激下機(jī)體免疫應(yīng)答的產(chǎn)物。所有抗體都具有與抗原特異性結(jié)合的能力?？贵w的化學(xué)本質(zhì)是免疫球蛋白即γ－球蛋白。不過(guò)只有當(dāng)免疫球蛋白針對(duì)已知抗原時(shí)，才能夠稱這種免疫球蛋白為抗體。免疫球蛋白屬于結(jié)構(gòu)牢固的分子物質(zhì)，可以經(jīng)受較大變化的環(huán)境作用，諸如56℃加溫，在室溫下較長(zhǎng)時(shí)期的貯藏，短期高或低pH處理，甚至與去污劑或尿素接觸后仍保持其抗體活性。

　　抗體活性是指與抗原特異性結(jié)合的能力，即二者之間的特殊親合力。兩者非共價(jià)鍵結(jié)合，結(jié)合的力包括氫鍵，靜電力，范德華力和疏水結(jié)合力?？贵w抗原之間的反應(yīng)是可逆的，在適宜的條件下仍可解離而性質(zhì)不變。

　　機(jī)體內(nèi)約有1億種不同的B淋巴細(xì)胞，每個(gè)獨(dú)立的B淋巴細(xì)胞只能接受一種抗原的刺激從而形成分泌一種抗體的能力，因此特異性是免疫應(yīng)答的特有標(biāo)志。如常識(shí)所見，麻疹患者愈后即獲得對(duì)麻疹的終生免疫，而這并不形成對(duì)天花的免疫?？贵w抗原特異性結(jié)合的本質(zhì)是抗原決定簇與抗體結(jié)合簇的專一適配性，抗原決定簇是指抗原分子上專有的化學(xué)基因，可以決定其刺激機(jī)體所產(chǎn)生抗體的特異性?？乖瓫Q定簇與其相對(duì)應(yīng)的抗體結(jié)合簇立體構(gòu)型完全相適應(yīng)。一個(gè)抗原分子可帶有多個(gè)不同的決定簇?？乖肿恿坑螅瑳Q定簇?cái)?shù)量愈多。決定簇?cái)?shù)目代表抗原分子的價(jià)?？贵w結(jié)合簇是在抗體分子上與對(duì)應(yīng)的抗原決定簇發(fā)生特異性結(jié)合的部位，位于Ig分子的抗原結(jié)合分段（V段）上，由重鏈和輕鏈的一部分可變區(qū)構(gòu)成。其特異性由氨基酸排列順序決定，約包括5～15個(gè)氨基酸。每個(gè)單體免疫球蛋白分子如IgG有2個(gè)結(jié)合簇www.brmmt.cn，IgA是二聚體，有4個(gè)結(jié)合簇，IgM是五聚體所以有10個(gè)結(jié)合簇。(但是，事情并不是絕對(duì)的。一種抗體除與相對(duì)應(yīng)的抗原發(fā)生特異性反應(yīng)外，也有可能與化學(xué)結(jié)構(gòu)部分相似的其它抗原發(fā)生反應(yīng)，這就是通常所說(shuō)的交叉反應(yīng)。交叉反應(yīng)可能由于兩種抗原有共同的決定簇，或由于兩者的抗原決定簇雖然不完全相同，但在立體化學(xué)結(jié)構(gòu)上密切相關(guān)，導(dǎo)致一種抗原能與另一種抗原的對(duì)應(yīng)抗體結(jié)合。)

　　正常情況下，抗體與抗原在機(jī)體內(nèi)結(jié)合后，可以被吞噬、排泄而將抗原清除。如果這種抗原屬于外源性致病抗原（細(xì)菌、病毒、毒素），可以由此達(dá)到殺滅或削弱抗原危害的目的。對(duì)于內(nèi)源性抗原，如已經(jīng)衰退、損傷或突變的異常細(xì)胞，也能被及時(shí)排除，實(shí)現(xiàn)機(jī)體自身的免疫調(diào)控。當(dāng)然，在異常情況下，抗體抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物將損傷組織、細(xì)胞，引起花粉過(guò)敏一類的變態(tài)反應(yīng)或免疫性疾病等不良后果。

　　不過(guò)長(zhǎng)期以來(lái)所謂特異性免疫血清抗體，不論是從人還是從動(dòng)物獲得的，也不論是主動(dòng)獲得還是被動(dòng)獲得的，實(shí)際上都是有許多種具有不同特性的抗體所組成的混合抗體。這是因?yàn)?，進(jìn)入機(jī)體的抗原往往帶有若干個(gè)抗原決定簇。此外，不同個(gè)體對(duì)同一抗原決定簇的反應(yīng)并不相同，即使同一個(gè)體不同時(shí)間接受抗原刺激后產(chǎn)生的反應(yīng)也不完全一致。由于人們無(wú)法將體內(nèi)已受抗原刺激的各種不同的B淋巴細(xì)胞克隆區(qū)分開，即使在體外能將它們分成單細(xì)胞，也無(wú)法讓其繼續(xù)生長(zhǎng)，增殖并分泌抗體。因此，用常規(guī)免疫方法制備的免疫血清抗體只能是數(shù)目眾多的單克隆抗體的混合物，現(xiàn)在，一般稱其為多克隆抗體（PcAb）。這種多克隆抗體存在特異性差、效價(jià)低、數(shù)量有限、動(dòng)物間個(gè)體差異大，難以重復(fù)制備等固有缺陷，許多場(chǎng)合下使用時(shí)難盡人意。

　　1975年，英國(guó)劍橋大學(xué)分子生物學(xué)研究室的Kohler和Milstein合作發(fā)表了題為“分泌預(yù)定特異性抗體的融合細(xì)胞的持續(xù)培養(yǎng)”的著名論文（Nature,256:495,1975）。他們將已適應(yīng)于體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞與綿羊紅細(xì)胞免疫小鼠脾細(xì)胞（B淋巴細(xì)胞）進(jìn)行融合，發(fā)現(xiàn)融合形成的雜交瘤細(xì)胞具有雙親細(xì)胞的特征：即像骨髓瘤細(xì)胞一樣在體外培養(yǎng)中能夠無(wú)限地快速增殖，又能持續(xù)地分泌特異性抗體，通過(guò)克隆化可使雜交細(xì)胞成為單純的細(xì)胞系，由此單克隆系就可以獲得結(jié)構(gòu)與各種特性完全相同的高純度抗體，即單克隆抗體（McAb）。上述方法創(chuàng)立了一項(xiàng)具有劃時(shí)代意義的新技術(shù)－利用B淋巴細(xì)胞雜交瘤產(chǎn)生單克隆抗體。這一技術(shù)的創(chuàng)立和迅速推廣，為所有需要制備和使用抗體的研究領(lǐng)域提供了全新的手段和制劑，促進(jìn)了生命科學(xué)諸學(xué)科的發(fā)展。兩位科學(xué)家也由于這一杰出貢獻(xiàn)榮獲1984年諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎(jiǎng)。

　　黃曲霉毒素B1是一種二氫呋喃氧雜萘鄰?fù)难苌?，分子量?12，屬于半抗原，不能直接誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。因此我們的工作首先是將黃曲霉毒素B1與載體蛋白連接，合成為完全抗原，以后的研究則基本上采用了前述雜交瘤－單克隆抗體技術(shù)的經(jīng)典方法：動(dòng)物免疫→免疫脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合→細(xì)胞篩選→用有限稀釋法分離出可分泌特異性抗體的單個(gè)細(xì)胞，再經(jīng)過(guò)克隆化培養(yǎng)建立雜交瘤細(xì)胞株并制備出大量單克隆抗體，從而在此基礎(chǔ)上最終建立了黃曲霉毒素B1（AFB1）的免疫檢測(cè)方法。

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