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		體外選擇的適配體中的電流的基礎(chǔ)

　　適體出現(xiàn)了三個(gè)獨(dú)立的小組，他們的工作在1990年首次出版的實(shí)驗(yàn)努力。杰拉爾德·F.喬伊斯在（加州La Jolla）斯克里普斯研究所的研究小組一直在尋找新的RNA酶的活性。體外突變，選擇和放大的研究人員使用分離的RNA酶的功能。這種方法成為體外選擇的適配體中的電流的基礎(chǔ)。

　　拉里·金的研究小組在美國(guó)科羅拉多大學(xué)（丹佛），試圖找出序列的T4 DNA聚合酶在體外。他們的圖書館是基于自然結(jié)構(gòu)，但包括一個(gè)隨機(jī)的8個(gè)核苷酸的序列。組命名該專利方法（美國(guó)專利5270163）在體外選擇“系統(tǒng)進(jìn)化指數(shù)富集的配體（SELEX）??。SELEX過(guò)程中可以找出最有選擇性的適體酶。

　　這一發(fā)現(xiàn)，一個(gè)月后，杰克·紹斯塔克在美國(guó)馬薩諸塞州總醫(yī)院（波士頓）和安德魯·D·埃林頓報(bào)告使用體外篩選分離分子與特定的配體結(jié)合的活動(dòng)。他們創(chuàng)造了一個(gè)圖書館100個(gè)核苷酸的隨機(jī)序列的任何已知的寡核苷酸序列無(wú)關(guān)。目標(biāo)沒有已知的核酸配體的有機(jī)染料。這組創(chuàng)造了這個(gè)詞的適體，其中來(lái)自拉丁問(wèn)博，意思是“以適應(yīng)。”

　　SELEX技術(shù)是一種技術(shù)，用于隔離功能的合成核酸。它允許對(duì)大的，隨機(jī)的寡核苷酸庫(kù)的體外篩選的一個(gè)反復(fù)的過(guò)程的吸附，回收，和擴(kuò)增的寡核苷酸序列（參見圖1）。可以訪問(wèn)在網(wǎng)上免費(fèi)www.isrec.isb-sib.ch/htpselex的高通量SELEX實(shí)驗(yàn)小學(xué)和衍生數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)庫(kù)。

　　SELEX過(guò)程開始于從圖書館的合成單鏈寡核苷酸。一個(gè)典型的SELEX第一輪將包含10 14 10 15獨(dú)特的序列?；瘜W(xué)合成的單鏈（β）的DNA，然后通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增，以便產(chǎn)生相應(yīng)的雙鏈DNA。根據(jù)所需的適體，該庫(kù)被轉(zhuǎn)換成其中的單鏈DNA鏈分離或通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄的RNA。單鏈DNA，然后進(jìn)行培養(yǎng)與利益的目標(biāo)。采用的構(gòu)象，使他們能夠與靶核酸，通過(guò)過(guò)濾分離，通過(guò)硝酸纖維素柱的親和柱（小分子）。的適體目標(biāo)雙鏈洗脫，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-PCR擴(kuò)增，RNA適體，或PCR的DNA適配子的情況下的情況下。這創(chuàng)造了一個(gè)更小的為下一個(gè)周期的分子濃縮池。該過(guò)程需要8至15次迭代的周期，進(jìn)行了越來(lái)越嚴(yán)格的條件下實(shí)現(xiàn)的適體的高親和力。

　　適配與抗體適體，相當(dāng)于抗體的核酸，具有的特性，使得它們優(yōu)于抗體使用時(shí)，作為蛋白質(zhì)組學(xué)傳感器的傳感元件（見表1）?？贵w鑒定過(guò)程取決于動(dòng)物的主機(jī)上。表達(dá)過(guò)程變得更加復(fù)雜時(shí)，目標(biāo)是毒素，這可能會(huì)損害主機(jī)，或低分子量的分子，它觸發(fā)一個(gè)最小的免疫原性反應(yīng)?？贵w的表現(xiàn)是很多具體的，雖然單克隆制劑已經(jīng)減少了很多，很多的可變性，編制仍然需要一個(gè)漫長(zhǎng)的凈化協(xié)議。

　　與此相反，在體外設(shè)計(jì)的適配體，從而獨(dú)立于任何動(dòng)物宿主。適配子來(lái)識(shí)別使用自動(dòng)寡核苷酸合成和篩選系統(tǒng)?？梢蕴岣叻肿舆M(jìn)化技術(shù)或通過(guò)設(shè)計(jì)合理的結(jié)合特異性，親和性，和適配體的穩(wěn)定性。此外，適體的識(shí)別過(guò)程中是可以改變的，與特定的目標(biāo)區(qū)域或在不同的約束條件下獲得的適體。一旦確定，適體，很容易創(chuàng)建，使用既定的化學(xué)合成工藝具有極高的重現(xiàn)性和純潔性。

　　適配體還可以用報(bào)道分子標(biāo)記的，而不會(huì)影響它們的親和力，采用的協(xié)議已經(jīng)建立的寡核苷酸標(biāo)記。7的適配體傳感器可以工作在各種各樣的樣品基體，包括非生理性緩沖液和溫度條件下，典型的抗體制劑變性。適體的相互作用的動(dòng)力學(xué)參數(shù)是可以改變的需求?？贵w是龐大而復(fù)雜的分子，非生理pH值和溫度，從而可以限制其使用可重復(fù)使用的傳感器敏感。然而，適配體可以經(jīng)受反復(fù)循環(huán)的變性和復(fù)性，不破壞其結(jié)構(gòu)。此外，它們可以在環(huán)境溫度下運(yùn)輸，而不會(huì)降低存儲(chǔ)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，在使用前，進(jìn)行大量的冷凍和解凍循環(huán)。

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