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		重組單克隆抗體使用先進的抗體庫和噬菌體展示

　　使用單克隆抗體在試管工具和分析已經(jīng)被建立。然而,開發(fā)的高度敏感性和特異性單克隆抗體類檢測系統(tǒng)可以阻礙的不可預(yù)測性和僵化的傳統(tǒng)的雜種細胞的技術(shù)。通過的重大進展,在基因工程,創(chuàng)建重組單克隆抗體是現(xiàn)在可能通過使用經(jīng)過良好測試的噬菌體展示技術(shù)。這種抗體匹配的優(yōu)勢生產(chǎn)單克隆抗體,同時提供傳統(tǒng)優(yōu)勢為發(fā)展中immunodiagnostic工具包和化驗。

　　重組單克隆抗體與傳統(tǒng)單克隆抗體在他們的基本功能。然而,由于他們是人造完全體外流程,他們提供更大的靈活性在他們的生產(chǎn)和更多的優(yōu)化機會創(chuàng)造后比典型的單克隆抗體。盡管重組單克隆抗體是一種較新的技術(shù),他們有一個記錄在人類的發(fā)展在各種研究療法和設(shè)置,擁有超過11000個這樣的抗體的產(chǎn)生日期和成功率大于95%。

　　使用重組單克隆抗體最近開始擴展到試管試驗發(fā)展更清晰定義的替代品,calibrators多克隆抗體在診斷檢測和控制。本文描述了生產(chǎn)重組單克隆抗體用噬菌體展示技術(shù),隨著例子的靈活性,抗體篩查優(yōu)化和應(yīng)用的抗體在試管試驗開發(fā)。

　　比較傳統(tǒng)的單克隆抗體

　　傳統(tǒng)的單克隆抗體是由注射小鼠、大鼠、或兔子與目標(biāo)免疫原在一段時間的幾周。一旦動物顯示足夠的免疫反應(yīng)的抗原,脾是收獲,抗體產(chǎn)生細胞永生化細胞系的融合。以下克隆和進一步測試,個人hybridomas生成提供長期供應(yīng)個人的單克隆抗體。在這個階段,單克隆抗體雜交瘤細胞創(chuàng)建使用傳統(tǒng)技術(shù)篩查特異性。整個過程免疫、雜交瘤細胞生產(chǎn),初步篩選需要2 - 6個月。后來,個人測試一下他們的單克隆抗體是在特定的免疫測定的適用性。

　　重要的專業(yè)知識、時間和專門的細胞培養(yǎng)和動物設(shè)施都需要hybridomas成功創(chuàng)建。此外,這個過程可能是不可預(yù)知的,也不會產(chǎn)生結(jié)果,如果目標(biāo)分子具有有毒或者糟糕的哺乳動物。一旦一個抗體雜交瘤細胞生產(chǎn)使用傳統(tǒng)技術(shù),它通常是固定在其特異性和同形像。而傳統(tǒng)的單克隆抗體可以測序和操縱,這是一個復(fù)雜的過程。此外,雜種細胞輸出可能會隨著時間變化,和一個失去它的細胞系可以發(fā)生在長期存儲。

　　圖1。噬菌體展示的抗原識別網(wǎng)站。每個噬菌體在圖書館攜帶遺傳物質(zhì)代表一個特定的抗體綁定網(wǎng)站顯示到目標(biāo)抗原作為噬菌體外套。

　　重組人類單克隆抗體已被開發(fā)來解決這些問題。已經(jīng),久負盛名,重組單克隆抗體已成功地用于各種治療、研究和診斷應(yīng)用程序。技術(shù)開發(fā)這樣的高度特異性,高親和性單克隆抗體是一個完全體外法。這種方法依賴于一個復(fù)雜的基因文庫,代表了人類潛在的抗體特異性曲目在管。抗體綁定序列在圖書館呈現(xiàn)給目標(biāo)免疫原使用噬菌體展示,這樣典型的抗體結(jié)合位點是可用的抗原作為一個部分的噬菌體外套而不是兩端的抗體分子。綁定特異性的抗體也直接綁定到其基因序列,可以捕獲隨著噬菌體(參見圖1)。

　　這種先進的噬菌體展示技術(shù)提供了以下好處相比傳統(tǒng)的單克隆抗體生產(chǎn)方法(見表我):

　　基因工程系統(tǒng)用于制造重組單克隆抗體是模塊化的設(shè)計與準(zhǔn)備訪問完整描述的DNA序列為促進抗體操縱。例如,特定的標(biāo)簽進行提純,固定化,檢測可以快速添加到抗體序列,和特定的isotypes或抗體片段可以由替換部件組成。創(chuàng)建基因融合通過直接加入堿性磷酸酶抗體或其他記者蛋白質(zhì)也是可能的。

　　生產(chǎn)安全是提高自重組單克隆抗體綁定信息將保留作為純化DNA和作為一個電子備份的質(zhì)粒DNA測序。 DNA是非常穩(wěn)定的,如果有必要,可以快速重新創(chuàng)建電子序列由基因合成抗體結(jié)合區(qū)域。因此,重組抗體可以迅速取代以防損失,提供無限、一致和完全定義的試劑供應(yīng)。

　　重組單克隆抗體生產(chǎn)細菌使用自動化、高吞吐量的系統(tǒng)。這個過程是更容易、更快、更少的勞動密集型比用動物和細胞培養(yǎng)試劑。

　　重組單克隆抗體生產(chǎn)發(fā)生體外 ,允許更大的余地選擇和篩選條件。例如,抗體可以識別出現(xiàn)的試劑,最終將被用于最后的診斷分析。此外,選擇過程可以直接以調(diào)整實現(xiàn)類似的序列特異性為降低或修改格式,如非磷酸化蛋白質(zhì)的版本。而傳統(tǒng)的單克隆抗體的生產(chǎn)還可以對磷酸化抗原,他們確認(rèn)后在這個過程中,只有如果他們發(fā)生的候選人中產(chǎn)生。

　　重組單克隆抗體可以進一步優(yōu)化以嚴(yán)格的選擇或額外的回合的突變,從而提高靈敏度有針對性的方式,可以量身定做,以一個測定的要求。

　　小得多的大量的抗原是必需的,通常0.5毫克或更少。

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