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		快速隔離使用噬菌體展示的單克隆抗體

　　組單克隆抗體最初生產(chǎn)的隔離相關(guān)的遺傳物質(zhì)從一個雜種瘤細(xì)胞株,或通過放大通過聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)池獲得它的細(xì)胞從免疫動物。一旦基因物質(zhì)被孤立,這是插入一個向量和表達(dá) 大腸桿菌。今天,重組單克隆抗體生產(chǎn)從高度復(fù)雜的庫的抗體基因,特別是由更始合成結(jié)構(gòu)多樣性代表人類抗體曲目,都是優(yōu)化了表達(dá)式大腸桿菌。

　　兩個這樣的庫開發(fā)的MorphoSys AG(德國慕尼黑)生產(chǎn)治療性抗體:HuCAL金,超過150億HuCAL特異性,鉑,超過450億的特異性。這些庫構(gòu)建了基于序列信息的獲得的生物信息學(xué)分析人類免疫系統(tǒng)。他們是由一個模塊化系統(tǒng)的基因變異的代表42框架在免疫球蛋白重型和輕型鏈,結(jié)合六互補性決定區(qū)域(CDR)磁帶,代表高變區(qū)域的抗體(參見圖2)。 1

　　CDR磁帶在圖書館被創(chuàng)建來模擬自然多樣性的抗原結(jié)合位點使用一個優(yōu)化的三核苷酸的策略,最大限度地提高潛在的多樣性。 2 與向量轉(zhuǎn)換包含庫的數(shù)十億特異性產(chǎn)生一個起始點隔離任何給定的特異性抗體。對于這些庫,這些抗體被創(chuàng)建在一個單價,因為Fc外事局格式區(qū)域沒有必要為抗原綁定。模塊化結(jié)構(gòu)的重組單克隆抗體片段意味著他們以后能很容易適應(yīng)二價或全身的免疫球蛋白分子。

　　快速隔離使用噬菌體展示的單克隆抗體

　　所需的抗體與抗原結(jié)合特定標(biāo)識等大型基因庫選擇而不是篩選。所有選擇的方法來綁定屬性的物理鏈接日期的每個抗體在圖書館(表現(xiàn)型)與遺傳信息編碼給定的抗體(基因型)。在眾多選擇技術(shù),最常用的是噬菌體展示,核糖體展示和酵母顯示。噬菌體展示是最受歡迎和最有建樹的選擇方法。

　　噬菌體展示過程開始通過感染抗體基因包含大腸桿菌宿主細(xì)胞與修改噬菌體創(chuàng)建女兒噬菌體,每個都包含一個矢量編碼的抗體庫成員。每個女兒噬菌體也會顯示相應(yīng)的抗體分子在其表面,這是通過基因融合抗體基因與蛋白質(zhì)的一個噬菌體外套。生物學(xué)的噬菌體抗體綁定屬性鏈接到相應(yīng)的遺傳信息,稍后可以生成一個單克隆細(xì)胞株。女兒噬菌體是從上層、沉淀、溶解在小卷,包含約10 13 噬菌體粒子每毫升,儲存冷凍供以后使用。

　　然后選擇所需的抗體通過噬菌體平移,這類似于固相免疫測定。 3 在這個過程中,抗原的興趣是第一固定化,通常在微型板塊井,磁珠,或一列(見圖3),噬菌體然后孵育抗原允許捕獲不多的噬菌體顯示抗體親和力與目標(biāo)分子。

　　在這一步,其他物質(zhì)如分子密切相關(guān)抗原可以被添加到解決方案能夠有效地阻止不受歡迎的結(jié)合位點和耗盡圖書館的不必要的特異性。綁定緩沖也可以操縱模擬更緊密的最后的試驗條件,從而提高機會,候選人將工作在計劃抗體免疫分析。經(jīng)過廣泛洗滌除去所有不明確的材料,eluted綁定噬菌體是和放大復(fù)制在新的宿主細(xì)胞。

　　這個選擇過程是反復(fù)幾次,導(dǎo)致一個噬菌體人口高度濃縮與成員表達(dá)所需的抗體(即。 ,那些專門把抗原的興趣)。選擇后,所需的抗體基因是孤立的作為一個基因庫和插入一個抗體表達(dá)載體。整個過程是在幾天內(nèi)完成,服從自動化。

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