購買時請注意選擇相應的產(chǎn)品名稱
| 從圖書館有針對性的篩選和抗體的優(yōu)化單克隆抗 | |||
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產(chǎn)生可溶性抗體片段、抗體基因克隆到phagemid必須表示沒有噬菌體外殼蛋白。 克隆個體抗體得到了孤立的基因輕、重鏈與限制酶或PCR擴增和religating成一個表達載體,不包含噬菌體蛋白基因。 引入新的宿主細胞后,細胞的轉化是孤立的單個菌落,每生產(chǎn)一個唯一定義的單克隆抗體。 當自動化系統(tǒng)使用,384年殖民地采摘及成長,和抗體表達誘導。 細胞隨后細胞溶解,溶解產(chǎn)物是由一個人檢測酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)特異性抗體物質的存在。
這個選擇,言論和篩選過程是完成在4 - 6周,結果在識別多個獨特的特異性單克隆抗體片段。 這些抗體然后生長在更大的規(guī)模進行提純。 整個過程從開始到交貨大約需要8周和代表一個大量的時間儲蓄相對于傳統(tǒng)抗體的生產(chǎn)方法。
單克隆抗體片段制造的這個過程是全功能的,包括完整的抗原結合位點與相同的內(nèi)在抗原結合親和力的抗體同行一樣。 他們有多種抗體格式(如。 ,單價外事局碎片,碎片)與二價外事局廣泛選擇的蛋白質標記,如6他的,為了簡化凈化和檢測。 由于模塊化的系統(tǒng),單克隆抗體片段也可以迅速轉化成完整的免疫球蛋白分子,isotypes IgG1 IgG2,IgG4,IgA,IgM。
對于大多數(shù)應用程序,二價外事局碎片是首選的,因為他們提供增強的熱望的存在導致兩個抗原結合位點。 然而,他們是明顯小于一個免疫球蛋白分子和更容易擴散。 此外,由于他們?nèi)狈c地區(qū)機會更少,Fc受體的非特異性結合。一個完全 體外 過程開發(fā)重組單克隆抗體可以指導篩查的協(xié)議,可以區(qū)分密切相關的抗原和改善綁定特征的候選人抗體。 幾個不同的例子有針對性的篩選協(xié)議和一個示例的一個優(yōu)化綁定活動如下所述。 在執(zhí)行一些特定的抗原定位和古典hybridomas是可能的,這個過程是更加雜亂,因為它出現(xiàn)在一個動物在哪些條件下不能輕易操縱。
修改后的氨基酸。 識別抗原對修改后的氨基酸,圖書館是第一孵育未修改的形式的肽為了移除抗體識別它。 這個過程稱為耗盡圖書館。 這時,其他相關肽通常添加,因為這樣做會提高最終的特異性的抗體,是實現(xiàn)(參見圖4)。圖書館是甄別與耗盡一個肽顯示所需的修改(例如。 ,或氧化磷酸化氨基酸)產(chǎn)生抗體,將有一個更好的機會展示獨特的特異性來期望形式的目標抗原而不是密切相關的分子。 4 確認成功,檢測特異性抗體的質量控制(QC)ELISA對目標和兩個相關和不相關的肽在凈化和擴大規(guī)模。
圖5。 抗體識別單個氨基酸變異。 HuCAL上映的圖書館對全身的野生型蛋白和單一突變和轉鐵蛋白結合兩BSA。 抗體3綁定到所有三種形式,但抗體1和2是突變體特定的。
高度保守的抗原。 阻塞/減法策略上面所描述的也適合選擇特定的抗體當抗原是高度保守(例如。 ,一種蛋白質,略有不同物種之間或有一個單一的氨基酸突變)。 圖5比較了三種抗體的能力來檢測野生型和單個氨基酸突變的靶抗原。 此外,候選人篩選對不同載體分子,BSA和轉鐵蛋白。 如果兩個目標和相關蛋白質可用,圖書館可以耗盡之前的特異性抗原篩查與想要的目標。
區(qū)分零件從整個。 有時候,希望能夠發(fā)現(xiàn)只有一部分目標抗原和不完整的情況下分子在乳溝的產(chǎn)品,例如。 如圖6,HuCAL庫,用于生成抗體兩解理多肽的氨基酸每10,而沒有認識到20氨基酸長篇肽。 就像在例子上面所討論的,這個不受歡迎的特異性與完整的肽用于耗盡圖書館前篩查與每個目標多肽。 這個過程是理想的生產(chǎn)anti-idiotypic抗體用于臨床監(jiān)測。
圖6。 區(qū)分解理肽從完整的肽。 圖書館的HuCAL第一次貧化與完整的肽(MNOP),然后是篩選與兩半,MN和OP抗體1和2是特殊的對于肽錳、和4和5是特殊的對于肽抗體3承認兩MNOP OP和OP。
提高重組單克隆抗體的親和力。 一個關鍵的優(yōu)勢生產(chǎn)抗體 體外 是,他們一旦創(chuàng)建,就可以進一步操縱和成熟。 在最簡單的情況下,這些操作需要改變一個重組單克隆抗體的結構性骨干或價沒有修改特異性。 因為HuCAL圖書館是模塊化的,優(yōu)化進一步綁定的親和力抗體也是可能的候選人做額外的輪的篩選與混合和匹配方法來插入新的CDR序列在獨特的側翼限制性位點在CDR磁帶(參見圖7)。這種策略改進了抑制性抗體的親和力與一只老鼠蛋白酶抑制劑逾300倍(見圖8)。
Immunodiagnostic重組單克隆抗體的應用積極的控制和Calibrators。 在病人血清抗體檢測人類以各種格式或isotypes位于心臟的一個廣泛的immunodiagnostic化驗。 例如,IgA免疫球蛋白g是關鍵指標,傳染性疾病和自身免疫,免疫球蛋白e是重要的在測試過敏反應,IgM用于診斷早期免疫反應。 大多數(shù)的這些測試需要積極的控制和calibrators。 今天,雖然病人血清是目前被認為是金標準,這些多克隆同位素控制需要重復校準由于產(chǎn)品質量的變化,數(shù)量有限,病毒污染的風險。 這個HuCAL技術創(chuàng)造了重組單克隆抗體在免疫球蛋白g,IgA,IgM格式在德國主要試管公司用于自身免疫測試。
配對的發(fā)展。 這個 體外 篩選過程提供了一個有效的路徑識別配對對elisa類型immunodiagnostic化驗。 這個過程可以識別檢測抗體匹配現(xiàn)有的捕獲抗體或反之亦然。 它還可以選擇一個新的配對對小說生物標志物。 如果第二次綁定抗體是必需的,圖書館可以屏蔽使用第一抗體的抗原呈現(xiàn)為篩查,包括飄散的第一抗體,選擇有針對性的向抗原而不是第一抗體。
當一個新的配對,是理想的,有兩種策略。 第一個策略是針對抗原標準平移,緊隨其后的是測試的所有可能的組合選擇的抗體作為捕獲和檢測抗體ELISA三明治。 如果這個策略不成功,第二個策略是標準平移其次是篩選使用標記(如。 ,生物素化的)抗原,抗體檢測他們是否適合作為捕獲分子在ELISA。 最好的捕獲抗體被用于一個新的淘金來檢測抗體的抗原結合當提出的捕獲抗體。
技術生產(chǎn)重組單克隆抗體提供了眾多的優(yōu)勢與傳統(tǒng)的雜種細胞方法來開發(fā)immunodiagnostic單克隆抗體測定。 5 的主要優(yōu)點是易于遺傳操作,結果從一個完全定義的模塊化系統(tǒng),它允許簡化下游變化和進一步優(yōu)化,配合個別試驗要求。 此外,由于這一過程發(fā)生沒有使用動物,有更大的靈活性在選擇條件用于初始代單克隆抗體,包括使用毒素和定向篩選策略。 最后,所有的重組單克隆抗體生產(chǎn)完全定義并獲得一個安全、長期供應自質粒DNA序列很容易存儲,迅速重建,充分表征。 因此,利用DNA重組技術提高了效率和靈活性在識別單克隆抗體診斷試驗開發(fā)。
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