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| 使用LowCross緩沖區(qū)可以提高酶聯(lián)免疫結(jié)果的可靠性 | |||
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可以顯示測定結(jié)果的可靠性，通過精密的檔案。臨床前研究，F(xiàn)DA要求ELISA驗證，包括精密型材精密型材的ELISA與標準緩沖液（PBS / BSA吐溫）和緩沖器（LowCross坦率生物科技有限公司，Weissensberg，德國）。一個實驗性的治療性蛋白質(zhì)藥物，測定在有競爭力的格式。在人血清中摻入蛋白質(zhì)藥物，然后用于測量在分析緩沖液稀釋為1:750。在檢測藥物的安全性研究，F(xiàn)DA指定的變異系數(shù)（CV）必須不超過15％，在整個測量范圍。
比較精密的 檔案揭示了顯著的程度這酶聯(lián)免疫吸附，用于在藥物研究，檢測到一個實驗性的治療性蛋白質(zhì)（即，候選藥物）在人血清中。這是進行了生物素標記的示蹤劑的蛋白作為藥物在競爭激烈的格式。檢測與NeutrAvidin HRP共軛。候選藥物在人血清中摻入以測量校準曲線。然后，血清稀釋1:750前測量的分析緩沖液中。此ELISA驗證只有在使用新的干擾減少緩沖液，在整個測量范圍內(nèi)，可以達到所要求的精度的FDA guidance.12的。
圖3。（點擊放大）用于免疫毒理學研究對免疫球蛋白的酶聯(lián)免疫吸附試驗豚鼠所示。在標準的試驗緩沖液（a）和50毫微克/毫升（1-6）和10毫微克/毫升（7-12）的濃度在LowCross緩沖器（二）稀釋的分析物。相當于在檢測過程中發(fā)展的一個步驟，捕獲和檢測抗體滴定板乙到G行的標準測定緩沖液（一），特異性控制誤報（A行）和空白值（行H）寵壞了解釋和評價。使用LowCross緩沖液（B），但是，防止假陽性信號。
來源：，帕拉生物科技有限公司（德國Gronau）。
另一個ELISA對豚鼠的免疫球蛋白，用于免疫毒理學研究，這是一個試驗，顯示了如何在新的緩沖區(qū)，可以幫助避免假陽性結(jié)果（見圖3）。的山羊抗豚鼠IgG F（AB'）2作為捕獲抗體和山羊抗豚鼠IgG（與Fcγ）生物素化的檢測器所用的抗體。豚鼠IgG抗體（待測物）稀釋的標準檢測緩沖區(qū)和緩沖區(qū)LowCross的。在圖中，取值范圍1-6表示的濃度為50納克/毫升，而代表10毫微克/毫升的范圍是7-12。
圖3中描繪板在檢測過程中發(fā)展的一個步驟。標準檢測緩沖板，可以看出，在采集和檢測抗體滴定行乙G.誤報特異性控制（??A行）和空白值（排H）寵壞了解釋和評??價。的LowCross緩沖區(qū)的使用防止了假陽性信號，而且，使檢測系列稀釋液中的行乙1-6至G和B到G 7-12（參見圖3b）。
這兩套比較酶聯(lián)免疫吸附的結(jié)果表明新的緩沖區(qū)的有效性對矩陣衍生的和未知的干擾影響，導(dǎo)致檢測不精確或誤報?？梢源_認的緩沖區(qū)的普遍適用性以及在其效力的記錄，異嗜性血清。
一個CE認證的診斷方法，對HAMA，ELISA從MEDAC聯(lián)系（德國Wedel）被用來檢測HAMA干擾。這ELISA測量跨橋異嗜性抗體。研究者使用它來測試市售HAMA血清中的面板Scantibodies公司實驗室公司（加利福尼亞州Santee）和從in.vent Diagnostica公司聯(lián)系（Hennigsdorf的，德國）得到的測試和示出一個HAMA的潛力的目的出售受體阻滯劑或HAMA-阻斷劑，防止干擾來自如血清。顯然，提供商所提供的面板包括范圍廣泛的不同的和非常關(guān)鍵的嗜異性血清以顯示潛在的對HAMA-阻斷劑和可能出現(xiàn)的問題從嗜性病人血清。
圖4。（點擊放大）選擇性結(jié)果緩沖區(qū)上LowCross HAMA反應(yīng)的效果，量化的研究使用的HAMA-ELISA MEDAC GMBH（德國Wedel）。新緩沖區(qū)推HAMA反應(yīng)在所有血清樣品下40-ng/ml在產(chǎn)品說明書中規(guī)定的截止明確檢測反應(yīng)。
當完整的板進行了測試，每一個異嗜性的干涉效應(yīng)被克服的干擾減少緩沖區(qū)。低于40毫微克/毫升，表明不存在干擾效應(yīng)的信號，根據(jù)對HAMA-ELISA手冊。簡短的研究表明，簡單地通過從標準品稀釋緩沖液（名為MEDAC室女-DIL）切換到新的測定緩沖液中（參見圖4），可以有效地最小化干擾。
重要的是要注意HAMA-ELISA的陽性對照仍為陽性與LowCross緩沖區(qū)，而不是推下截止。（這些數(shù)據(jù)在圖中未示出）的陽性對照是不哈馬斯，但交聯(lián)的二抗（山羊抗小鼠IgG抗體）。這表明，從正常的檢測抗體的信號而受到負面影響的新的測定緩沖液。
應(yīng)用潛力
免疫處理醫(yī)療問題，不同顯著所需的答案。
檢測抗原檢測傳染性疾病的檢測檢測甚至非常低的濃度的抗原，例如，病毒顆粒。既不漏報，也不是可以接受的誤報。檢測抗體可以表現(xiàn)出極高的親和力與KD值在10-11或10-12米的范圍內(nèi)，每一種干擾，應(yīng)該大大降低，為了得到最可靠的診斷。良好的可靠性在最初的測試中，可以最大限度地減少成本的關(guān)鍵感染的二線測試。對于感染性疾病的檢測，測定抗體和干擾結(jié)合的親合性的親合性之間的差異是非常大的。
另一方面，自身免疫性疾病檢測和過敏測試地址不同的醫(yī)療問題。在這些實驗中，患者的自身抗體或過敏性抗體，不顯示非常高的親和力應(yīng)該被檢測出。病人具有中等親和力的抗體可以是疾病結(jié)構(gòu)的一部分，因此，應(yīng)包含在該信號甚至中等親合力結(jié)合。
完全不同的醫(yī)療需求傳染性疾病檢測對過敏性測試表明，有必要為不同程度的減少干擾。顯然，有很強的干擾降低的解決方案實現(xiàn)了最大的安全性。然而，在這樣的濃溶液，測定抗體表現(xiàn)出非常高的親和力。換句話說，一個具有非常強的干擾減速進行的測定具有非常高的耐任何種類的干涉。較溫和的干擾降低，更多的干擾的影響會發(fā)生，即使使用的干擾減少緩沖區(qū)。但是，這樣一個溫和的干擾減速，甚至中等親和力的病人抗體可以正確檢測。
圖5。（點擊放大）影響類風濕血清HAMA-ELISA檢測緩沖液（MEDAC VIR-DIL）相比于交聯(lián)反應(yīng)的的各種配方的LowCross緩沖的。交聯(lián)，會導(dǎo)致免疫診斷試劑中的錯誤的結(jié)果。新緩沖區(qū)的所有的制劑可以防止不必要的類風濕因子和檢測抗體之間的結(jié)合，根據(jù)交聯(lián)的親合性。檢測抗體和分析物之間的結(jié)合是較高的親和力。
為了滿足不同免疫診斷需求，坦率生物科學提供LowCross的緩沖區(qū)免疫診斷試劑制造商指定為輕度，經(jīng)典，強的配方。的經(jīng)典制劑提供了測定抗體的親和力和大多數(shù)干擾效應(yīng)的強度之間的最佳折衷，并適用于大多數(shù)應(yīng)用。為專業(yè)用戶，如免疫診斷試劑制造商創(chuàng)建的先進配方溫和強，有特殊的應(yīng)用需要。所有三種配方可以推干擾效應(yīng)的交聯(lián)反應(yīng)HAMA-ELISA截止40-ng/ml（見圖5）來自下類風濕因子血清，但經(jīng)典和強有較大的影響，從而導(dǎo)致檢測具有更好的可靠性。這些試驗結(jié)果表明，這種新的緩沖區(qū)方法不僅可以普遍使用，但也適應(yīng)具體的實驗和臨床要求，如果需要。
這種干擾減速動作模式是低和中等的親和力結(jié)合（干涉效應(yīng)），一方面，高親和性結(jié)合（檢測抗體對分析物）的另一區(qū)別。因此，它是不是一個受體阻滯劑的某些物質(zhì)，而是親和鑒別。如果太多的HAMA是在患者的樣品中，這不能被阻塞過于低濃度的HAMA-受體阻滯劑。然而，沒有觀察到這種效果，因為它的作用方式不同的新的緩沖區(qū)。雖然HAMA-阻斷劑可能會對給藥的濃度過低，新的親和鑒別器的性能是不依賴于病人的具體HAMA濃度。這進一步增強與新的測定緩沖液中做的檢測的可靠性和魯棒性。
結(jié)論
描述的研究在這篇文章中展示，親和鑒別一個新的緩沖區(qū)有可能處理具有很寬的頻譜的干擾。減少干擾，提高了檢測的可靠性。FDA要求非常高的精度水平進行臨床前或臨床研究免疫。各種實驗已經(jīng)證明的廣泛的潛在的新的測定稀釋劑，以確保達到所要求的精度和可靠性。
直到最近，只有特定的和非常有限的，以克服干擾的方法，如HAMA-受體阻滯劑，是可用的。而是一個新的方法，可用于幾乎任何類型的干擾，既不限于哈馬斯或heterophiles已經(jīng)開發(fā)也沒有交叉反應(yīng)或基體效應(yīng)。這是普遍的，消除所有這些問題的一種技術(shù)。如果必要的話，可以進一步調(diào)整，以滿足特定的需求。顯示其潛在的臨床前和臨床研究中檢測和食品診斷以及人類診斷檢測緩沖區(qū)。它是被用來在橫流測定，酶聯(lián)免疫吸附，蛋白質(zhì)芯片和Western印跡試劑盒的生產(chǎn)。
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