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非特異性結(jié)合和基體效應(yīng)交叉反應(yīng)密切相關(guān)現(xiàn)象 | |||
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但是,也有差異,這些效應(yīng)的分子起源。這些差異在日常實驗室程序很少被注意到。如果交叉反應(yīng)物是已知的,有競爭的交叉反應(yīng)物的濃度可以測量它的交叉反應(yīng)性,那么這的確是一個交叉反應(yīng)。在非特異性結(jié)合的情況下,比目標(biāo)分析物的濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于物質(zhì)都存在。這些可以是清蛋白或免疫球蛋白,或什至表面,如ELISA孔或Western印跡膜的固定化抗體的蛋白質(zhì)陣列或斑點11
基質(zhì)效應(yīng)的術(shù)語是用來表示試樣和影響的靶分析物的測量的過程中出現(xiàn)的所有組件的所有干擾的影響。13的總和,如果實際的分子造成的影響是不確定的,但已知的來自試樣,那么它被稱為基體效應(yīng)。樣的效果和其他之間的邊界是靈活的,有時不明確。有些基質(zhì)效應(yīng)派生從antianimal抗體,其他內(nèi)源性干擾的結(jié)果,或只是引起的試樣的粘度,pH值,或鹽的濃度。
內(nèi)源性標(biāo)本組件原因
即使是自然存在的蛋白質(zhì)樣品中的免疫測定法可干擾。一些眾所周知的干擾物質(zhì)的人血清白蛋白,補體因子,溶菌酶,α-1抗胰蛋白酶,血纖維蛋白原。4的低分子量的分析物,可以與白蛋白結(jié)合。這使得難以分析物的抗體。此外,許多激素運輸?shù)鞍捉Y(jié)合,導(dǎo)致空間位阻的檢測。因此,確定激素免疫診斷試劑是公知的,具有高的變異系數(shù)。
此外,許多蛋白能夠結(jié)合其他物質(zhì),這是其生物功能的一部分。白蛋白,補體,和C-反應(yīng)蛋白是天然的受體為許多物質(zhì)。非特異性結(jié)合和交叉反應(yīng)是表達他們的生物學(xué)功能,但可能會干擾檢測。內(nèi)源性蛋白可以結(jié)合的檢測抗體,作為一個干擾因素,或可能掩蓋了目標(biāo)分析物。溶菌酶,例如,非特異性結(jié)合的大多數(shù)蛋白質(zhì)具有低的等電點。因此,抗體等電點為約五可以綁定,從而搭建一座橋梁之間的捕獲和檢測抗體形成。另一種重要的內(nèi)源性成分的效果是由強烈的含脂試樣的干擾。一些分析物是脂溶性的,因此,測定抗體和分析物之間的鍵可以由脂質(zhì)的影響。
一個通用的解決方案無論他們來自矩陣,交叉反應(yīng),從內(nèi)源性物質(zhì),或從病人疾病,大多數(shù)干擾的影響有一個共同點:它們涉及到中低親和力的結(jié)合反應(yīng)在檢測過程中procedure.6具體結(jié)合的檢測抗體,分析物是高親和力的結(jié)合。然而,各種綁定是否只有中低親和力或高親和可能會導(dǎo)致在相同的檢測信號。
一個通用方法,以防止這些干擾的影響,將阻止所有低收入和中等親和力結(jié)合,而不是只有專門異嗜性抗體阻斷。這可以實現(xiàn)通過與高嚴(yán)格的試驗緩沖液。這種辦法可以防止一切干擾影響,一步到位,但它也將產(chǎn)生負(fù)面影響的正確??信號檢測抗體。因此,使用高嚴(yán)謹(jǐn)緩沖區(qū)是??不是一種有效的選擇。高親和力結(jié)合的檢測抗體必須不會受到影響。
之間的高親和力結(jié)合,一方面,中低親和力結(jié)合其他歧視在這方面的成功是很重要的。這是稱為LowCross緩沖液,新開發(fā)的坦率Bioscience公司聯(lián)系(Weissensberg,德國)的測定緩沖液中的行動模式。通過高親和性結(jié)合不具有有害的影響,此緩沖區(qū)不降低高親和力的結(jié)合劑的真實信號。但它確實大大減少中低親和性結(jié)合。這可以防止大多數(shù)干擾效應(yīng)的外觀,不論是否是已知的分子的干擾源??梢杂米鳈z測緩沖液或抗體稀釋液的干擾減速器。即,試樣或測定抗體,或兩者兼而有之,可以在此緩沖液稀釋。最重要的是,測定抗體和分析物之間的結(jié)合反應(yīng)發(fā)生在LowCross緩沖區(qū)。
抗體用于免疫診斷試劑盒的檢測器將被存儲在長期的抗體稀釋液中。因此,新的緩沖區(qū),也可以在一個穩(wěn)定的配方稱為LowCross-HRP。此穩(wěn)定劑溶液HRP偶聯(lián)物也表現(xiàn)出該技術(shù)的基本盡量減少干擾的影響,當(dāng)然。有了它,檢測抗體可以被存儲在4℃下使用的低濃度長時間。這樣可以節(jié)省在測定過程中的預(yù)稀釋步驟。
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