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常用標(biāo)記的檢測(cè)抗體的免疫分析標(biāo)準(zhǔn)的分析物與 | |||
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經(jīng)常使用的標(biāo)簽是堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶(HRP),熒光染料,放射性同位素,免疫-PCR,DNA酶,很多時(shí)候。不幸的是,即使這些標(biāo)簽可能會(huì)導(dǎo)致干擾。分析通常標(biāo)志著探測(cè)器抗體或,對(duì)于競(jìng)爭分析,標(biāo)準(zhǔn)的分析物與一個(gè)標(biāo)簽。不幸的是,即使這些標(biāo)簽會(huì)產(chǎn)生干擾。
例如,熒光染料用于標(biāo)記是疏水性的,從而可以改變抗體的結(jié)合特性。另外,染料本身可以結(jié)合到其他物質(zhì)?;蛘撸摰鞍踪|(zhì)的溶解性可能會(huì)顯著降低時(shí),用熒光染料標(biāo)記。的抗原與抗體的特異結(jié)合也可造成負(fù)面影響,這會(huì)導(dǎo)致相對(duì)的未標(biāo)記的抗體的標(biāo)記抗體的親和力降低。在這些非特異效應(yīng)的染料也可以導(dǎo)致增加的結(jié)合的抗體,以測(cè)試的塑料表面,如ELISA板,結(jié)合到樣品中的內(nèi)源性蛋白,或結(jié)合到捕獲抗體。在這些情況下,會(huì)發(fā)生假陽性的測(cè)量的被分析物在沒有或整個(gè)試驗(yàn)將遭受高背景。與蛋白質(zhì)陣列,單點(diǎn)增加的背景熒光觀察。該signal-to-noise比劣化。例如,大多數(shù)熒光染料標(biāo)記是疏水的,因此可以改變綁定特性的抗??體。進(jìn)一步,染料本身可以綁定到其他物質(zhì)或者,蛋白質(zhì)的溶解度可明顯降低當(dāng)貼上了熒光染料。在這些情況下,假陽性測(cè)量在沒有發(fā)生的分析物,或整個(gè)試驗(yàn)將遭受高背景。與蛋白質(zhì)陣列,增加背景熒光的單點(diǎn)是觀察。的信噪比惡化。
同樣,蛋白質(zhì)或抗體結(jié)合的熒光染料,其中一些能夠減少,甚至關(guān)掉,熒光染料。所有的反應(yīng)發(fā)生在蛋白質(zhì)陣列是非常復(fù)雜的,因?yàn)橥瑫r(shí)使用多種捕獲和標(biāo)記的檢測(cè)抗體在一個(gè)反應(yīng)體積。因此,從樣品中的蛋白質(zhì)或標(biāo)記的抗體與單點(diǎn)的非特異性結(jié)合的可能性更大。涉及從樣品組件,影響抗體的干擾效果更常見的是在11蛋白質(zhì)陣列比傳統(tǒng)檢測(cè)。因此,蛋白質(zhì)的非特異性結(jié)合的概率從樣品或標(biāo)記的抗體與單點(diǎn)是更大的。干擾的影響涉及組件從樣本影響抗體更常見的蛋白質(zhì)陣列比傳統(tǒng)的化驗(yàn)。 11
交叉反應(yīng)或交叉反應(yīng)的抗體行使的??情況下,它能夠綁定目標(biāo)分析物以外的結(jié)構(gòu)。通常情況下,這些結(jié)構(gòu)顯示出極大的相似性的分析物。實(shí)施例。將代謝產(chǎn)物的分析物,具有類似的分子結(jié)構(gòu),和一個(gè)隨機(jī)的相似性或同源性的氨基酸序列的蛋白質(zhì)的化學(xué)物質(zhì)。交叉反應(yīng),或交叉與場(chǎng)合,當(dāng)抗體結(jié)合的能力結(jié)構(gòu)行使其他玩具目標(biāo)分析物。經(jīng)常,這些結(jié)構(gòu)顯示一個(gè)偉大的相似性的分析物。
交叉反應(yīng)可以影響競(jìng)爭力的分析,在一個(gè)非常戲劇性的方式,因?yàn)橹挥幸粋€(gè)檢測(cè)抗體潛在的交叉反應(yīng)。4,6調(diào)查的一部分,大多數(shù)試驗(yàn)驗(yàn)證,包括驗(yàn)證完成時(shí),根據(jù)FDA的指導(dǎo)原則是推薦12
交叉反應(yīng),能起到顯著的作用,蛋白質(zhì)的檢測(cè)Western印跡和免疫組化應(yīng)用。這額外的頻段,在染色或細(xì)胞結(jié)構(gòu)變得明顯。在許多情況下,這些不需要的綁定的確切的分子的原因是未知的。在Western印跡法,其原因往往會(huì)簡單地是天然存在的被分析物蛋白質(zhì)的降解產(chǎn)物。降解也可以導(dǎo)致從有條不紊的方法。但是,在某些情況下,這個(gè)故事的降解是不是真正的,真實(shí)的原發(fā)性或繼發(fā)性的抗體的交叉反應(yīng),必須考慮到。
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