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| 考慮各種因素試管autoantigens當選擇為他們的分析 | |||
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在整個歷史的immunodiagnostics,新的試驗設(shè)計和策略導致變化的需求的一個關(guān)鍵組成部分:抗原。 例如,在甲狀腺自身免疫,此舉從免疫熒光,通過血凝酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)成為可能通過識別微粒體抗原。 在接下來的幾年中,分子生物學技術(shù)使識別甲狀腺過氧化物酶(TPO)作為分子目標;隨后,重組蛋白抗原制備取代了原油本地。
今天,重組抗原通常是第一個也是唯一的選擇,這樣的標準分析作為ELISA、多路珠系統(tǒng),immunodots,自身抗體微陣列檢測許多。 然而,由于復雜的生物學、重組技術(shù)還不能滿足特定抗原的要求。 本文將討論的所有關(guān)鍵方面在選擇適當?shù)腶utoantigens用于商業(yè)自身免疫測試。
自身免疫性疾病是通用術(shù)語為一組病理臨床條件專門的白細胞和抗體,是由病人的免疫系統(tǒng)攻擊細胞和組織。 著名的例子包括自身免疫性風濕病疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡和類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)和器官特定疾病如自身免疫性甲狀腺炎和1型糖尿病。
建立自身抗體的存在作為一種重要的臨床診斷工具用于免疫性疾病首次達到60年前,研究人員描述了微觀現(xiàn)象LE細胞。 1 今天,這第一個抗核抗體(ANA)診斷被認為是概念的誕生在系統(tǒng)性自身免疫性疾病的血清學IVDs。 十年之后,其他研究人員頒發(fā)了第一個分析自身免疫性抗體與自身免疫性疾病相關(guān)器官具體。 2 又過了十多年前間接免疫熒光顯微鏡上選定的組織切片可以應用在臨床診斷識別大規(guī)模系統(tǒng)性疾病。 3
25年前,一個重要的進步是通過引入ELISAs例行自體免疫診斷。 ELISA和其適應用于抗體檢測導致重大改進的敏感性和特異性自身抗體測定。 4、5 即使在今天,使用上的方便、靈敏度高、樣品處理量的快速ELISA使得有用和不可或缺的工具,自身抗體檢測在臨床實驗室。 6
在1980年代早期,ELISA替代了過去的常規(guī)血凝試驗檢測微粒體抗體,現(xiàn)在被稱為傳真照片。 然而,它變得明顯,ELISA的顯著提高分辨率,歧視能力和可再生的量化只能足夠用于篩查臨床血清樣本如果免疫質(zhì)量和生物化學純度的抗原ELISA的跟上高分析標準。
到1990年,經(jīng)典核汽車?抗原如Sm,rnp Sm(U1-snRNP復雜),DNA威尼斯平底漁船?異構(gòu)酶(Scl 70),我/ Ro,一學生histidyl-tRNA合成酶(喬1)已經(jīng)被用于化驗,即使他們是不可靠的,而不是純粹地。 此外,小批量大小不允許他們無處不在的可用性。 因為大多數(shù)這樣的本地抗原是動物來源(比如獲得。 ,小牛胸腺),即使有滿意的純度和數(shù)量,他們的診斷價值有限。 7
當時,一個重組戰(zhàn)略是試圖消除這種限制和困難,盡管只有溫和的成功。 盡管分子生物學領(lǐng)域已經(jīng)發(fā)展成一個高度動態(tài)的紀律,早期通過生產(chǎn)重組抗原(通常為小片段或融合蛋白表達 大腸桿菌 )是不成功的。 非特定的背景信號噪聲引起的污染 大腸桿菌 組件導致假陽性結(jié)果。
在1990年代早期,日益增長的需求autoantigens定義單一滿足不斷上升的需求質(zhì)量而言,純度,很多很多,結(jié)果重現(xiàn)性與批量生產(chǎn)產(chǎn)量增加導致了嚴重的瓶頸的供應商用抗原。 這個瓶頸也增加了商業(yè)生產(chǎn)過程壓力開發(fā)創(chuàng)新的解決方案來緩解的問題所造成的更大需求為可靠抗原。
在1990 - 1991年,我們公司前,伊萊亞斯診斷(弗萊堡,德國)有困難產(chǎn)生足夠高質(zhì)量的人類從本地資源,TPO適合IVDs。 (增長的原因之一是包括預訂從臨床倫理委員會)。 此外,遇到不能解決的問題,同時也試圖制造這種膜結(jié)合抗原recombinantly在 大腸桿菌 。 任何嘗試,如果在所有實際可控,recombinantly在哺乳動物細胞表達抗原會太貴。 因此,一個替代方法,收到了很少的關(guān)注在臨床診斷。 一個策略是建立recombinantly產(chǎn)生人類autoantigens使用真核瞬態(tài)細胞表達系統(tǒng)基于重組baculoviruses(Autographa californica多核多角體病病毒)和昆蟲細胞(Spodoptera frugiperda,或Sf9)。 8、9
1992年,這Sf9-based表達系統(tǒng),Diarect取得了突破,這是很重要的,因為TPO其免疫反應性是依賴構(gòu)象。 10 提供證據(jù)的TPO原則適度性的桿狀病毒表達系統(tǒng)。 在接下來的五年中,幾個目標抗原pro?,包括一定數(shù)量的簡化安娜/ ENA抗原,這是常規(guī)臨床診斷需要和ELISA試驗系統(tǒng)。 當時,Diarect回顧了利弊的各種細胞表達系統(tǒng)(例如, 大腸桿菌 ,桿狀病毒/ Sf9,哺乳動物和酵母細胞),以及他們是否適合表達診斷上相關(guān)的目標就不同的分析系統(tǒng)(見 表我 )。
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