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		開發(fā)新技術(shù)執(zhí)行矩陣綁定和直接測量的總血紅蛋

　　糖化血紅蛋白(HbA1c)是唯一適合糖尿病的診斷和監(jiān)測其治療與一個(gè)特定的數(shù)字每年測試(通常是按季度)。最近的項(xiàng)目由聯(lián)合國、世界衛(wèi)生組織、國際糖尿病聯(lián)合會(IDF)已經(jīng)解決全球糖尿病的流行和需要更好的診斷和治療。在2010年國家Glycohemoglobin標(biāo)準(zhǔn)化程序(NGSP)制造商的論壇的主席IDF問制造商的商業(yè)糖化血紅蛋白測定系統(tǒng)考慮如何提供準(zhǔn)確、可靠的糖化血紅蛋白化驗(yàn)到不發(fā)達(dá)國家,沒有資源來讓目前銷售測試可用。

　　一些電流百分?jǐn)?shù)(% HbA1c)糖化血紅蛋白測定方法包括離子交換或親和柱色譜的基礎(chǔ)測試,這是昂貴的和不是移動。其他方法結(jié)合免疫測定(需要冷藏)和/或相對昂貴的墨盒和米。一個(gè)技術(shù)已經(jīng)被開發(fā)出來,使得設(shè)計(jì)的低成本系統(tǒng),滿足需求為糖尿病測試在發(fā)展中國家。

　　這種科技的核心(描述在美國專利7195923和7695973)是一個(gè)分離矩陣,用化學(xué)方式修改為包含兩個(gè)帶負(fù)電荷的團(tuán)體和boronate團(tuán)體。當(dāng)pH緩沖流經(jīng)矩陣是酸性的,帶正電荷的糖化血紅蛋白結(jié)合,非糖化帶負(fù)電荷的團(tuán)體。當(dāng)pH值是基本,血紅蛋白失去電荷和離子釋放綁定。在基本的pH值,boronate綁定不僅順式二醇還持有的葡萄糖糖化血紅蛋白糖化血紅蛋白在矩陣。血紅蛋白綁定在矩陣每個(gè)條件下通過反射率測量是量化膜的使用系統(tǒng)的血糖計(jì)類型表。膜可以被納入簡單的條,可以存儲不制冷。系統(tǒng)利用這項(xiàng)技術(shù)允許更廣泛的診斷和監(jiān)測的糖尿病在發(fā)展中國家和發(fā)達(dá)國家。

　　分離矩陣準(zhǔn)備

　　基膜用于分離矩陣是一個(gè)親水、滲透膜與孔隙大小足夠大以允許紅細(xì)胞進(jìn)入。 Sartobind膜都由Sartorious和橫向弗洛膜通過Porex集團(tuán)(費(fèi)爾,GA)可以用作基膜。運(yùn)動的樣品和緩沖通過膜可以是橫向或縱向。

　　下面描述的工作使用膜在橫向流配置。膜厚度影響測量靈敏度,厚膜能夠綁定更多的血紅蛋白。一個(gè)10密耳厚膜沒有足夠的血紅蛋白結(jié)合,提供一個(gè)合適的信號在原型試驗(yàn)系統(tǒng)。一個(gè)厚度至少15毫升是需要提供足夠的約束力和信號。因?yàn)榉瓷渎蕼y量了膜,膜表面應(yīng)相對均勻,減少脫到帶鋼的變化結(jié)果。兩個(gè)膜進(jìn)行測試包含共價(jià)鏈接羧酸團(tuán)體,這些函數(shù)作為帶負(fù)電荷的團(tuán)體在技術(shù)。

　　Boronate組添加到膜通過共價(jià)結(jié)合m aminophenylboronate(APB)羧基團(tuán)體已經(jīng)在膜用碳化二亞胺1乙基3(3-dimethylaminopropyl)碳化二亞胺(EDC)。隨著反應(yīng)時(shí)間的發(fā)展,更多的boronate組添加到羧基基團(tuán)膜。羧基團(tuán)體的數(shù)量降低,而總血紅蛋白綁定減少。 boronate團(tuán)體的數(shù)量增加,糖化血紅蛋白bindingreaches一個(gè)高原。反應(yīng)時(shí)間的控制,以獲得最佳的糖化綁定沒有顯著損失總綁定。

　　檢測是開始添加第一個(gè)緩沖區(qū)(pH值6.5)和借鑒反射率測量。 100%的反射率為每條設(shè)置為測量反射率的參考材料。的反射率的膜后,立即帶插入到計(jì)是邏輯參考使用。然而,測定精度的應(yīng)用改善了膜的反射率與緩沖流經(jīng)它作為參考。在一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中,測定精度的正常樣本5.5%如果參考是膜孤獨(dú)。精度是2.9%當(dāng)參考是膜與緩沖流經(jīng)它。

　　血液樣本被添加和沖洗通過膜作為緩沖繼續(xù)流。這個(gè)緩沖區(qū)還包含一個(gè)洗滌劑,hemolyzes紅血細(xì)胞釋放血紅蛋白。在pH值為6.5,非糖化和糖化血紅蛋白帶正電和綁定ionically帶負(fù)電荷的團(tuán)體在矩陣。這個(gè)綁定時(shí)發(fā)生迅速和血紅蛋白穿過矩陣。在pH值為6.5,boronate團(tuán)體都在一個(gè)配置,不支持綁定的糖化血紅蛋白,因此束縛血紅蛋白將包含相同比例的糖化血紅蛋白作為示例。足夠數(shù)量的緩沖區(qū)添加刪除非綁定(超額)血紅蛋白從矩陣。血紅蛋白的量綁定到矩陣用于測量總血紅蛋白使用反射率測量。光源是一個(gè)領(lǐng)導(dǎo)在一個(gè)名義上的430 nm波長,使用415 nm吸收峰的血紅蛋白的定量。

　　在第一次測量,緩沖在pH值為9.5添加和沖洗通過膜。的電荷血紅蛋白變化,和離子綁定是逆轉(zhuǎn)。這個(gè)boronate組改變配置,支持綁定的糖化血紅蛋白作為它被釋放從帶負(fù)電荷的團(tuán)體。綁定到boronate團(tuán)體是快速和發(fā)生的血紅蛋白是移動通過矩陣。結(jié)果數(shù)量的血紅蛋白,被綁定到矩陣來

　　糖化血紅蛋白使用反射率測量。兩個(gè)綁定步驟快速和允許矩陣是適應(yīng)要么流通型或橫向流方法。

　　圖1顯示了改變反射率(% R相對于干帶反射)作為一個(gè)分析的進(jìn)展。當(dāng)?shù)谝粋€(gè)緩沖區(qū)添加(1)、反射率下降,因?yàn)榫仃囎兊酶油该鳌?血后添加(2),其反射率下降——因?yàn)榍懊娴母邼舛鹊难t蛋白穿過矩陣,吸收光線。作為非綁定血紅蛋白沖洗通過矩陣(3)、反射率增大到一個(gè)高原,由于ionically綁定血紅蛋白中剩余矩陣和一個(gè)反射率測量(一個(gè))。當(dāng)?shù)诙€(gè)緩沖區(qū)添加(4),反射最初滴,然后增加作為非糖化血紅蛋白前沖洗通過矩陣(5),反射率增大到某一高原由于糖化血紅蛋白中剩余矩陣,和第二反射測量(B)。這兩個(gè)反射測量(A和B)用于計(jì)算總和糖化血紅蛋白濃度。糖化血紅蛋白的比例占總血紅蛋白是用來計(jì)算在樣本的% HbA1c如下所述。5 1

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