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可用的CCD成像技術(shù)與儀器檢測(cè)試驗(yàn)?zāi)芰?/th> | |||
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可用的CCD成像技術(shù)與儀器和IVD制造商的愿望和藥物篩選組開發(fā)的多波長(zhǎng)復(fù)用的檢測(cè)試驗(yàn)?zāi)芰Φ目焖僭鲩L(zhǎng),共同促進(jìn)的發(fā)展,新的1,2 -二氧環(huán)乙烷的綠色和發(fā)射光譜紅移。(CCD相機(jī)更綠色和紅色的波長(zhǎng)光譜敏感。)多波長(zhǎng)檢測(cè)使眾多的應(yīng)用程序,包括免疫,核酸檢測(cè),記者酶定量復(fù)用。胃蛋白酶原II胃蛋白酶原,我比潛在的臨床定量多重發(fā)光酶免疫分析法已被證明。該法采用突變體提供不同的發(fā)射波長(zhǎng)的熒光素酶標(biāo)記19的同步化學(xué)發(fā)光檢測(cè)多個(gè)酶或標(biāo)簽的要求不吸收分子,提供離散波長(zhǎng)的光發(fā)射。最受歡迎的金剛烷基的穩(wěn)定的1,2 -二氧環(huán)乙烷基板商業(yè)化,迄今在475-480納米的范圍內(nèi)發(fā)出固有的化學(xué)發(fā)光。
最綠色發(fā)光系統(tǒng)依賴于能量傳遞給熒光或熒光素衍生物。能量轉(zhuǎn)移系統(tǒng)不能被用于同時(shí)檢測(cè)多種酶。的1,2 -二氧環(huán)乙烷AP提供的可見光譜中的綠色區(qū)域的發(fā)光波長(zhǎng)的基板最近被描述。
該襯底,BZPD,苯并噻唑磷酸二氧環(huán)乙烷,是一種無(wú)色,無(wú)熒光,且穩(wěn)定,斷裂后,觀察到550nm的發(fā)射最大值。使用北極星HTS工作站CCD成像平臺(tái)(Applied Biosystems公司;貝德福德,MA),它已經(jīng)可以同時(shí)測(cè)量從星Galacton-β-半乳糖苷酶催化分解AP催化分解BZPD和藍(lán)色發(fā)光的綠色發(fā)光發(fā)射在最大為475 nm。使用這些基板,3.0 ? 10 -19摩爾的AP中可檢測(cè)到的存在下可達(dá)6.4 ? 10 -16摩爾的β-半乳糖苷酶,和3.2 ? 10 -17摩爾的β-半乳糖苷酶的存在下,可以檢測(cè)到高達(dá)1.0 ? 10 -17摩爾的AP。
第三代的Galacton-Star基板,由于其降低的pKa值,允許使用的β-半乳糖苷酶作為酶標(biāo)記的膜印跡應(yīng)用。21,22使用Galacton-Star和一個(gè)β-半乳糖苷酶和AP標(biāo)記抗體與AP基板,兩個(gè)蛋白抗原在一個(gè)單一的膜雜交的順序的雙檢測(cè)已經(jīng)實(shí)現(xiàn)。23可用的綠色發(fā)射BZPD的使兩色可復(fù)用的膜固定化的蛋白質(zhì)和核酸的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。
最近,已經(jīng)合成了發(fā)射紅色和黃色的光的1,2 -二氧環(huán)乙烷分子。螺[1,2 -二氧環(huán)乙烷-3,6'苯并(三)色烯的化學(xué)誘導(dǎo)分解]用叔-二甲基硅氧基觸發(fā)上面的2'位會(huì)導(dǎo)致低效率的黃色光發(fā)射24分解3 -乙氧基一個(gè)苯并環(huán)(二)呋喃-2 -基或苯并(二)噻吩-2 -基取代的4,4 -二異丙基-1,2 -二氧環(huán)乙烷和具有5 -或7 -位上的甲硅烷氧基觸發(fā)發(fā)射紅光615-628納米的范圍內(nèi)。25化學(xué)分解誘導(dǎo)中的二甲亞砜存在下,用四丁基氟化銨。紅色發(fā)光分子在多通道生物分析其潛在的應(yīng)用是特別有趣的。
一類新的紅色發(fā)射的用于堿性磷酸酯酶的化學(xué)發(fā)光底物已經(jīng)研制成功。捷光的CCD(物L(fēng)umigen Inc。)的26位化,它們提供了在任一解決方案為基礎(chǔ)或基于膜的檢測(cè)方法,高效率的持續(xù)發(fā)光。在這些襯底包含從芳香族硫酯5,5' - dimethylluciferin一個(gè)的環(huán)外enolphosphate來(lái)自的。去磷酸化產(chǎn)生瞬態(tài)dioxetanone中間體分解產(chǎn)生橘紅色的光。超過5日志的線性檢測(cè)已被證明與IMMULITE第三代TSH測(cè)定試劑盒中使用這種類型的襯底,并用基于膜的檢測(cè)27。
另一個(gè)類的AP底物的化學(xué)發(fā)光物L(fēng)umigen APS銷售,也能夠被用在任何一個(gè)解決方案為基礎(chǔ)或以膜為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法。這些9,10 -二氫吖啶基片28,29的去磷酸化產(chǎn)生的瞬態(tài)dioxetanone中間體。這些基板提供峰值信號(hào)的快速發(fā)展和持續(xù)發(fā)光。
藥物發(fā)現(xiàn)應(yīng)用1,2 - 二氧雜環(huán)丁烷基板的藥物靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)研究和高通量藥物篩選的使用很普遍。此外,越來(lái)越多的基板受聘于功能分析,基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的努力。應(yīng)用范圍包括記者基因檢測(cè),以監(jiān)測(cè)基因表達(dá),第二信使定量,蛋白激酶檢測(cè),蛋白質(zhì)相互作用分析。定量環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的免疫系統(tǒng)提供。
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