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		強大的新的化學(xué)發(fā)光過氧化物酶底物

　　根據(jù)在新的基板上表現(xiàn)出創(chuàng)新的檢測試劑在四個數(shù)量級的過氧化物酶的線性響應(yīng)，并達(dá)到峰值強度在溶液中以秒為單位。哈希姆AKHAVAN Tafti，威廉·G·克里普斯，雷努卡DeSilva酒店，文化謝羅伯特A. Eickholt，理查德S.漢德利，朗達(dá)·林斯基，Michael E. Mazelis的，A.保羅Schaap物L(fēng)umigen公司（位于Southfield，MI）的PS-阿托基板與辣根過氧化物酶的反應(yīng)產(chǎn)物的發(fā)光。辣根過氧化物酶（HRP）的兩種最常用的酶標(biāo)記物在醫(yī)學(xué)診斷和研究中的應(yīng)用，另一個是堿性磷酸酶（AP）的辣根過氧化物酶免疫測定法，核酸雜交測定中經(jīng)常應(yīng)用，部分原因是由于準(zhǔn)備可用的過氧化物酶結(jié)合的抗體的半抗原，例如生物素，異硫氰酸熒光素，地高辛。采用基于HRP催化化學(xué)發(fā)光檢測，自動分析的VITROS免疫診斷體系的鄰臨床診斷公司（力登，NJ），是在商業(yè)用途。辣根過氧化物酶相對于AP的更小尺寸的裝置中的結(jié)合物，它的使用應(yīng)該是不易發(fā)生固體表面的非特異性結(jié)合。一個較小的標(biāo)簽酶使酶抗體結(jié)合物具有免疫識別干擾的可能性較小。盡管HRP為一個標(biāo)簽，化學(xué)發(fā)光檢測試劑酶存在相對 ??較少的優(yōu)勢。新試劑參展提高了靈敏度，寬動態(tài)范圍，速度，方便用戶使用，將有助于把握作為一個標(biāo)簽HRP酶的好處。

　　大多數(shù)目前使用的試劑包括環(huán)狀酰肼魯米諾作為基板，以及增強劑（參見圖1）。2一類新的過氧化物酶檢測的化學(xué)發(fā)光試劑的前面所述。2在這些試劑，包括PS-1和PS-3從物L(fēng)umigen公司（密西根州Southfield），包含9,10 -二氫吖啶基板，經(jīng)過氧化酶產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光吖啶酯。吖啶酯反應(yīng)的試劑，形成不穩(wěn)定的dioxetanone中間體（參見圖2）的過氧化氫 ??中存在。試劑配方并入增強子加速并延長酶促氧化的9,10 -二氫吖啶基板。術(shù)語“襯底”的使用并不嚴(yán)格HRP檢測試劑的動作。而實際的機制被認(rèn)為是更復(fù)雜的比典型的酶 - 底物反應(yīng)。

　　唯一的物種與酶反應(yīng)，直接在其靜止?fàn)顟B(tài)下，供給的過氧化氫可以以游離形式或作為一個復(fù)合物，例如過氧化脲，過硼酸鹽，或鹽percarboxylate。辣根過氧化物酶與過氧化氫源的查詢結(jié)果減少過氧化氫氧化鉀和氧化酶的兩個較高氧化態(tài)的中間體的反應(yīng)。氧化的中間體氧化增強劑在單電子的過程中，增強作為電子繼電器。氧化增強劑，反過來，所謂的基板，其中，在氧化時，與過氧化氫或分子氧形成的化學(xué)物種反應(yīng)氧化。增強減少回其原生狀態(tài)的過程中，，準(zhǔn)備調(diào)解進(jìn)一步氧化acridan。

　　幾種物質(zhì)是已知的作為過氧化物酶介導(dǎo)的氧化反應(yīng)的促進(jìn)劑的功能。無數(shù)的具有酚基團(tuán)的化合物是有效的，作為芳族胺，某些雜環(huán)化合物，特別是苯并噻唑，和芳基硼酸。4,5的最后一組的化合物可能通過轉(zhuǎn)換苯酚通過與過氧化氫 ??反應(yīng)原位。

　　增強劑的有效性似乎是主要根據(jù)其氧化電勢，在反應(yīng)條件下，可檢測基片的氧化電勢的關(guān)系。6促進(jìn)過氧化物酶的活性增強劑，同樣適用于顯色，熒光，和luminogenic的反應(yīng)過程中，由于它是上游的最終檢測反應(yīng)是至關(guān)重要的電子轉(zhuǎn)移過程。然而，新發(fā)現(xiàn)的過氧化物酶催化反應(yīng)必須進(jìn)行仔細(xì)的優(yōu)化方面促進(jìn)劑的選擇和濃度。

　　過氧化物酶的化學(xué)發(fā)光檢測試劑都是經(jīng)過精心優(yōu)化多元的解決方案。典型的配方的來源，包括過氧化氫，在基板，一種或多種促進(jìn)劑，表面活性劑，和其他專有組件在一個緩沖區(qū)中。他們往往必須提供兩個組件。

　　此外，必須每天工作溶液，因為有限的底物/增強劑/過氧化氫混合物的貯存穩(wěn)定性。這些組件之間的反應(yīng)速度慢，在過氧化物酶的情況下，可能會導(dǎo)致不可接受的高的試劑空白和反應(yīng)物的消耗。需要準(zhǔn)備的新鮮的工作溶液，這些試劑的使用，特別是在自動分析系統(tǒng)的復(fù)雜性。

　　然而現(xiàn)在，一個強大的新家族的化學(xué)發(fā)光檢測試劑為HRP已開發(fā)的物L(fēng)umigen。這些試劑中的兩個已經(jīng)被商業(yè)化：PS-阿托檢測在溶液中檢測和TMA-6印跡應(yīng)用。，這些試劑的最顯著的特性是他們的能力，要被存儲在一個單一的容器中準(zhǔn)備使用的解決方案。儲存至少3周的工作溶液在室溫下長達(dá)4個月，在4℃下已經(jīng)看到，不會導(dǎo)致性能的下降。

　　新的試劑，這是基于一個全新的不同的基板上，在5個數(shù)量級的線性響應(yīng)表現(xiàn)出過氧化物酶。6分鐘后，加入辣根過氧化物酶的解決方案所用試劑高原的光強度的測量導(dǎo)致在酶濃度在5個數(shù)量級的線性校準(zhǔn)曲線的。另外一個特點是，化學(xué)發(fā)光發(fā)射的發(fā)展非常迅速地與其他襯底相比，在不到1分鐘內(nèi)達(dá)到在溶液中測定的峰強度。調(diào)查這些試劑的能力，在這篇文章中報道。

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